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乳糖是乳制品中的主要成分之一，其含量的测定对于乳制品的质量控制和生产具有重要意义。本标准采用酶-比色法测定乳及乳制品中乳糖的含量。

1.范围
本标准适用于液态和固态乳及乳制品中乳糖的测定。

2.引用标准
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价方法
GB/T 5009.5-2016 食品中糖的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.9-2016 食品中糖的测定 酶法
GB/T 5009.10-2016 食品中糖的测定 红外光谱法
GB/T 5009.11-2016 食品中糖的测定 高效液相色谱-蒸发光散射检测法

3.原理
将样品中的乳糖经过酶解反应，生成葡萄糖和半乳糖，再将半乳糖经过酶解反应，生成葡萄糖和乳糖，最后将生成的葡萄糖与邻苯二酚缩合生成有色产物，其吸光度与乳糖的含量成正比。

4.试剂和仪器
4.1 试剂
（1）乳糖酶：活力为200 U/mL，应符合GB/T 23528-2009中的规定。
（2）邻苯二酚：纯度不低于99%。
（3）氢氧化钠：纯度不低于96%。
（4）氯化钾：纯度不低于99%。
（5）乙醇：纯度不低于95%。
（6）蒸馏水：用于制备试剂和洗涤。
4.2 仪器
（1）分光光度计：可测量波长范围为400~700 nm。
（2）恒温水浴器：可控制温度在37℃±0.5℃。

5.样品的制备
将样品加入适量的蒸馏水中，搅拌均匀后过滤，取滤液作为样品。

6.操作步骤
6.1 标准曲线的制备
称取0.1 g乳糖，加入50 mL蒸馏水中，搅拌均匀后取1 mL，加入试管中，加入0.5 mL乳糖酶，37℃恒温水浴中酶解30 min，加入0.5 mL氢氧化钠溶液，再加入0.5 mL氯化钾溶液，搅拌均匀后加入0.5 mL邻苯二酚溶液，再加入0.5 mL乙醇，搅拌均匀后加入蒸馏水至刻度，混合均匀，即得标准曲线液。分别取0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL标准曲线液，加入试管中，加入0.5 mL氢氧化钠溶液，再加入0.5 mL氯化钾溶液，搅拌均匀后加入0.5 mL邻苯二酚溶液，再加入0.5 mL乙醇，搅拌均匀后加入蒸馏水至刻度，混合均匀，测量吸光度，制作标准曲线。

6.2 样品的测定
取样品5 mL，加入试管中，加入0.5 mL乳糖酶，37℃恒温水浴中酶解30 min，加入0.5 mL氢氧化钠溶液，再加入0.5 mL氯化钾溶液，搅拌均匀后加入0.5 mL邻苯二酚溶液，再加入0.5 mL乙醇，搅拌均匀后加入蒸馏水至刻度，混合均匀，测量吸光度，根据标准曲线计算样品中乳糖的含量。

7.结果的计算与表示
样品中乳糖的含量，按下式计算：
C=（As-A0）/a
式中：
C——样品中乳糖的含量，mg/mL；
As——样品的吸光度；
A0——空白试剂的吸光度；
a——标准曲线斜率，mg/mL。

8.精密度和准确度
8.1 精密度
在同一实验室内，采用同一仪器、同一试剂和同一操作人员，对同一样品进行6次测定，计算相对标准偏差，不得大于2.0%。
8.2 准确度
在同一实验室内，采用同一仪器、同一试剂和同一操作人员，对同一样品进行测定，计算相对误差，不得大于5.0%。

相关标准：
GB/T 23528-2009 乳糖酶
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价方法
GB/T 5009.5-2016 食品中糖的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.9-2016 食品中糖的测定 酶法
GB/T 5009.10-2016 食品中糖的测定 红外光谱法