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叶绿素是植物中的一种绿色色素,是光合作用的重要组成部分。水果、蔬菜及其制品中叶绿素含量的测定是衡量其营养价值的重要指标之一。本标准采用分光光度法测定水果、蔬菜及其制品中叶绿素含量。
1.范围
本标准规定了水果、蔬菜及其制品中叶绿素含量的测定方法。
2.仪器和设备
2.1 分光光度计:选择波长范围为400~700nm的分光光度计。
2.2 1cm光程比色皿:具有良好的透明度和平整度。
2.3 离心机:转速为3000r/min。
2.4 超声波清洗器:功率为100W。
3.试剂和材料
3.1 乙醇:纯度为95%。
3.2 丙酮:纯度为99%。
3.3 氯仿:纯度为99%。
3.4 石油醚:纯度为60~90℃。
3.5 氯化钠:纯度为99%。
3.6 氢氧化钠:纯度为99%。
3.7 醋酸钠:纯度为99%。
3.8 双氧水:纯度为30%。
3.9 叶绿素标准品:纯度为98%。
4.样品的制备
4.1 样品的选择:选择新鲜、无病虫害、无机械损伤的水果、蔬菜及其制品。
4.2 样品的制备:将样品洗净,去皮、去籽、去茎,切成小块,用离心机离心,去除汁液,然后用超声波清洗器清洗3次,每次清洗10min,用纸巾吸干水分,称取样品0.5g,加入10mL乙醇,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL丙酮,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL氯仿,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL石油醚,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,即为样品溶液。
5.操作步骤
5.1 制备叶绿素标准曲线:取叶绿素标准品0.1mg,加入10mL乙醇,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL丙酮,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL氯仿,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL石油醚,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,即为叶绿素标准品溶液。取叶绿素标准品溶液1mL,加入10mL乙醇,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL丙酮,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL氯仿,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL石油醚,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,即为叶绿素标准品1mg/L的溶液。取叶绿素标准品溶液1mL,加入10mL乙醇,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL丙酮,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL氯仿,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL石油醚,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,即为叶绿素标准品0.1mg/L的溶液。依次取叶绿素标准品溶液0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL,加入10mL乙醇,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL丙酮,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL氯仿,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL石油醚,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,分别测定其吸光度,制备叶绿素标准曲线。
5.2 测定样品:取样品溶液1mL,加入10mL乙醇,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL丙酮,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL氯仿,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,加入10mL石油醚,振荡均匀,放置30min,过滤,取滤液1mL,分别测定其吸光度,计算样品中叶绿素含量。
6.计算
6.1 叶绿素标准曲线的制备
将叶绿素标准品的吸光度值作为纵坐标,叶绿素标准品的质量浓度作为横坐标,绘制叶绿素标准曲线。
6.2 样品中叶绿素含量的计算
将样品的吸光度值代入叶绿素标准曲线中,查找对应的叶绿素含量。
7.结果的表示
样品中叶绿素含量的单位为mg/kg。
相关标准:
GB/T 5009.3-2017 食品中灰分的测定
GB/T 5009.5-2017 食品中蛋白质的测定
GB/T 5009.6-2016 食品中脂肪的测定
GB/T 5009.7-2016 食品中水分的测定
GB/T 5009.8-2016 食品中灰分的测定