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L-羟脯氨酸是一种重要的氨基酸，对人体健康有着重要的作用。生乳中含有丰富的L-羟脯氨酸，因此对生乳中L-羟脯氨酸的测定具有重要意义。本标准旨在规范生乳中L-羟脯氨酸的测定方法，以保证测定结果的准确性和可靠性。

1.范围
本标准适用于生乳中L-羟脯氨酸的测定。

2.试剂和仪器
2.1 试剂
（1）氯化钠（NaCl）。
（2）氢氧化钠（NaOH）。
（3）硫酸铜（CuSO4）。
（4）硫酸钠（Na2SO4）。
（5）硫酸铵（NH4）2SO4）。
（6）硫酸（H2SO4）。
（7）L-羟脯氨酸标准品。
2.2 仪器
（1）分光光度计。
（2）电子天平。
（3）恒温水浴器。

3.样品的制备
将生乳样品加热至80℃，保持10分钟，然后冷却至室温，用氯化钠调节pH值至7.0左右，离心10分钟，取上清液作为样品。

4.测定方法
4.1 标准曲线的绘制
称取L-羟脯氨酸标准品0.1g，加入10ml 0.1mol/L的NaOH溶液，加热至80℃，保持10分钟，冷却至室温，用0.1mol/L的H2SO4溶液调节pH值至7.0左右，加入10ml 0.1mol/L的CuSO4溶液，用0.1mol/L的Na2SO4溶液稀释至100ml，摇匀，即得L-羟脯氨酸标准溶液。
取不同浓度的L-羟脯氨酸标准溶液，分别加入试管中，加入相应的试剂，用分光光度计测定吸光度值，绘制标准曲线。

4.2 样品的测定
取样品10ml，加入试管中，加入相应的试剂，用分光光度计测定吸光度值，根据标准曲线计算出L-羟脯氨酸的含量。

5.结果的计算
样品中L-羟脯氨酸的含量，按下式计算：
L-羟脯氨酸含量（mg/100ml）=（样品吸光度值-空白吸光度值）×标准曲线斜率×1000/样品体积（ml）×10

6.精密度和准确度
6.1 精密度
在同一实验室内，重复测定6次，计算相对标准偏差（RSD），RSD不应大于2.0%。
6.2 准确度
加入已知量的L-羟脯氨酸标准品，测定其回收率，回收率应在98%~102%之间。

相关标准：
GB/T 5009.5-2016 食品中氨基酸的测定
GB/T 5009.124-2016 奶及奶制品中氨基酸的测定
GB/T 5009.201-2003 食品中氨基酸的测定 气相色谱法
GB/T 5009.202-2003 食品中氨基酸的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.203-2003 食品中氨基酸的测定 离子交换色谱法