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芒果细菌性黑斑病是芒果树上的一种常见病害，严重影响芒果的产量和品质。为了保护芒果种质资源，提高芒果的抗病虫能力，本标准制定了芒果细菌性黑斑病的检测方法和标准。

1. 检测方法
1.1 样品采集
从芒果树上采集病叶、病枝、病果等样品，避免采集健康部位的样品。样品应在采集后立即送至实验室进行检测。

1.2 样品处理
将样品表面的杂质清除干净，然后用无菌水或0.1mol/L磷酸盐缓冲液洗涤3次，每次洗涤时间为5分钟。

1.3 DNA提取
将样品切碎，加入适量的提取液，经过离心、加热、冷却等步骤，提取样品中的DNA。

1.4 PCR扩增
将提取的DNA加入PCR反应体系中，进行PCR扩增。PCR反应体系的组成和反应条件详见本标准。

1.5 电泳分析
将PCR扩增产物进行电泳分析，根据目标片段的大小和带型特征，判断样品中是否存在芒果细菌性黑斑病。

2. 检测标准
2.1 PCR反应体系
PCR反应体系的组成如下：

反应体积（μL） 反应体系组成
2.5 10×PCR缓冲液
0.2 25mmol/L MgCl2
0.2 10mmol/L dNTPs
0.2 10μmol/L引物F
0.2 10μmol/L引物R
0.05 Taq DNA聚合酶
1 模板DNA
20 去离子水

2.2 PCR反应条件
PCR反应条件如下：

反应步骤 温度（℃） 时间（min）
预变性 94 5
变性 94 30s
退火 55 30s
延伸 72 1min
最终延伸 72 10

2.3 结果判定
样品中存在目标片段，且带型特征与阳性对照一致，则判定为芒果细菌性黑斑病阳性；否则判定为芒果细菌性黑斑病阴性。

3. 检测要求
3.1 实验室条件
检测实验室应具备以下条件：

（1）具备PCR扩增和电泳分析设备；
（2）具备无菌操作条件；
（3）具备生物安全操作条件。

3.2 人员要求
检测人员应具备以下要求：

（1）具备PCR扩增和电泳分析技能；
（2）具备无菌操作技能；
（3）具备生物安全操作技能。

4. 检测结果判定
4.1 阳性判定
样品中存在目标片段，且带型特征与阳性对照一致，则判定为芒果细菌性黑斑病阳性。

4.2 阴性判定
样品中不存在目标片段，或带型特征与阳性对照不一致，则判定为芒果细菌性黑斑病阴性。

相关标准：
GB/T 1840-2003 粮食、油料和饲料中真菌毒素的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.33-2003 食品中亚硝酸盐的测定 纳氏显色法
GB/T 5009.35-2003 食品中硝酸盐的测定 纳氏显色法
GB/T 5009.37-2003 食品中亚硝胺的测定 气相色谱法
GB/T 5009.39-2003 食品中黄曲霉毒素B1的测定 高效液相色谱法