茶叶是我国传统的饮品之一，其中茶碱和可可碱是茶叶中的两种重要成分。茶碱是一种生物碱，具有兴奋神经、提神醒脑、增强心肌收缩力等作用；可可碱则是一种天然的生物碱类物质，具有提神醒脑、增强心肌收缩力、扩张冠状动脉等作用。因此，测定茶叶中可可碱和茶碱的含量对于评价茶叶的品质和功效具有重要意义。

本标准采用高效液相色谱法测定茶叶中可可碱和茶碱的含量。该方法具有灵敏度高、准确度高、重现性好等优点，适用于茶叶中可可碱和茶碱含量的测定。

具体操作步骤如下：

1. 样品制备

将茶叶样品研磨成粉末，过筛后取约0.5g样品，加入50mL锥形瓶中，加入10mL甲醇，超声处理10min，离心10min，取上清液过滤，取1mL过滤液加入10mL量瓶中，用甲醇定容，摇匀备用。

2. 仪器设备

高效液相色谱仪、色谱柱、色谱柱保护器、移液器、量筒、瓶塞、注射器、超声波清洗器等。

3. 色谱条件

色谱柱：C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）

流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（35:65）

流速：1.0mL/min

检测波长：254nm

柱温：30℃

4. 标准曲线的绘制

取一定浓度的可可碱和茶碱标准品，分别制成一系列不同浓度的标准溶液，用同样的方法测定其峰面积，绘制标准曲线。

5. 样品测定

取一定体积的样品溶液，用同样的方法测定其峰面积，根据标准曲线计算出可可碱和茶碱的含量。

相关标准
GB/T 8313-2018 茶叶
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