葡萄是一种重要的果树作物,其品种繁多,但由于品种间的相似性较高,传统的形态学鉴定方法存在一定的局限性。因此,利用分子标记技术进行葡萄品种鉴定已成为一种重要的手段。其中,SSR分子标记法是一种常用的方法。
SSR分子标记法是利用多态性的微卫星序列进行分子标记的方法。其原理是在目标DNA序列中寻找含有重复序列的微卫星位点,然后利用PCR扩增这些位点,通过电泳分离并测定其大小,最终得到一组DNA指纹图谱。由于微卫星序列在不同品种之间的长度和数量存在差异,因此可以用来区分不同品种。
本标准规定了葡萄品种鉴定的SSR分子标记方法。具体步骤如下:
1. 样品采集:选择健康的葡萄叶片或果实作为样品,避免受到病虫害的影响。将样品放入离心管中,标注好编号和采集时间,放入冰箱保存。
2. DNA提取:采用CTAB法或商用DNA提取试剂盒进行DNA提取。提取的DNA应具有高纯度和高质量,以保证PCR扩增的准确性。
3. PCR扩增:选择适当的SSR引物对进行PCR扩增。PCR反应体系包括模板DNA、引物、dNTPs、Taq酶和缓冲液等。PCR反应条件根据引物的特性进行优化,一般包括预变性、变性、退火和延伸等步骤。
4. 电泳分离:将PCR产物进行电泳分离,根据大小分离出不同的DNA片段。可以选择聚丙烯酰胺凝胶电泳或毛细管电泳等方法进行分离。
5. 数据分析:根据电泳结果,利用专业软件进行数据分析,得到DNA指纹图谱。可以通过比对已知品种的指纹图谱,确定未知品种的身份。
本标准的实施可以提高葡萄品种鉴定的准确性和可靠性,同时也可以用于葡萄遗传多样性分析和DNA指纹图谱构建等方面。
相关标准
GB/T 19212.1-2011 葡萄品种鉴定方法 第1部分:形态学特征鉴定法
GB/T 19212.2-2011 葡萄品种鉴定方法 第2部分:同工酶电泳法
GB/T 19212.3-2011 葡萄品种鉴定方法 第3部分:RAPD分子标记法
GB/T 19212.4-2011 葡萄品种鉴定方法 第4部分:AFLP分子标记法
GB/T 19212.5-2011 葡萄品种鉴定方法 第5部分:SNP分子标记法