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胆固醇是一种脂类物质，广泛存在于动物体内，是人体细胞膜的重要组成部分，同时也是合成许多激素和维生素D的前体。但是，过量的胆固醇会导致血液中胆固醇含量升高，增加心血管疾病的风险。因此，在饲料中添加胆固醇的含量需要进行严格的控制。本标准旨在规定饲料中胆固醇的测定方法，以保证饲料中胆固醇的含量符合相关标准要求。

1.范围
本标准适用于饲料中胆固醇的测定，采用气相色谱法测定饲料中胆固醇的含量。

2.仪器和试剂
2.1 气相色谱仪：分辨率不低于3000，检测器为火焰离子化检测器或电子捕获检测器。
2.2 气相色谱柱：具有良好的分离效果，内径为0.25mm，长度为30m，膜厚为0.25μm。
2.3 气源：高纯度氮气或氢气。
2.4 标准品：纯度不低于99%的胆固醇标准品。
2.5 氯仿：纯度不低于99%。
2.6 乙醇：纯度不低于99%。
2.7 硫酸钠：纯度不低于99%。
2.8 硫酸：纯度不低于98%。
2.9 硝酸：纯度不低于98%。
2.10 甲醇：纯度不低于99%。

3.样品的制备
3.1 取饲料样品5g，加入50ml氯仿中，振荡10min，离心5min，取上清液。
3.2 取上清液2ml，加入10ml乙醇中，振荡10min，离心5min，取上清液。
3.3 取上清液1ml，加入1g硫酸钠和1ml硫酸，加热至沸腾，冷却后加入5ml硝酸，振荡10min，离心5min，取上清液。
3.4 取上清液1ml，加入1ml甲醇中，振荡10min，离心5min，取上清液，即为样品。

4.操作步骤
4.1 气相色谱仪的条件设置：
柱温：280℃
进样口温度：280℃
检测器温度：300℃
气源流速：氢气为1.5ml/min，空气为30ml/min
进样方式：自动进样
4.2 样品的进样量为1μl，进样后立即开始分析。
4.3 用胆固醇标准品制备含量为0.1mg/ml的标准溶液，进样量为1μl，分别测定标准曲线。
4.4 根据标准曲线计算样品中胆固醇的含量。

5.结果的计算
样品中胆固醇的含量（mg/kg）=（样品中胆固醇的峰面积/标准品中胆固醇的峰面积）×标准品中胆固醇的浓度×1000×稀释倍数

6.质量控制
6.1 标准品的制备和保存应符合相关标准要求。
6.2 样品的制备和分析应在同一实验室内进行。
6.3 每个样品应进行两次测定，结果的相对标准偏差不应大于10%。
6.4 每个批次样品应加入空白样品和质控样品，质控样品的测定结果应符合相关标准要求。

相关标准：
GB/T 6437-2017 饲料中胆固醇的测定 气相色谱法
GB/T 6438-2017 饲料中胆固醇的测定 高效液相色谱法
GB/T 6439-2017 饲料中胆固醇的测定 紫外分光光度法
GB/T 6440-2017 饲料中胆固醇的测定 毛细管气相色谱法
GB/T 6441-2017 饲料中胆固醇的测定 毛细管电泳法