地西泮是一种广泛应用于兽医领域的镇静剂和抗惊厥药物，也被用于饲料中的添加。然而，地西泮的过量使用可能会对动物的健康产生负面影响。因此，为了保障动物的健康和饲料的质量安全，需要对饲料中地西泮的含量进行测定。

本标准采用高效液相色谱法测定饲料中地西泮的含量。该方法具有灵敏度高、准确度高、重现性好等优点，适用于各种类型的饲料中地西泮的测定。

1. 原理
将饲料样品经过提取、净化后，采用高效液相色谱法进行分析。地西泮在高效液相色谱柱中与流动相发生相互作用，通过检测样品中地西泮的峰面积或峰高，计算出地西泮的含量。

2. 仪器和设备
（1）高效液相色谱仪
（2）色谱柱：C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）
（3）移液器、量筒、瓶塞、滤膜等

3. 试剂和材料
（1）乙腈：色谱纯
（2）水：超纯水或蒸馏水
（3）饲料样品
（4）地西泮标准品

4. 操作步骤
（1）样品制备：取适量饲料样品，粉碎并混匀，称取0.5 g样品，加入50 mL乙腈，超声提取30 min，离心10 min，取上清液过滤。
（2）色谱条件：
流动相：甲醇-水（70:30，v/v）
流速：1.0 mL/min
柱温：25℃
检测波长：230 nm
进样量：20 μL
（3）标准曲线制备：取地西泮标准品，分别加入适量乙腈，制备不同浓度的标准溶液，通过高效液相色谱法测定各浓度标准溶液的峰面积或峰高，绘制标准曲线。
（4）样品测定：将样品溶液通过高效液相色谱法进行分析，测定样品中地西泮的峰面积或峰高，通过标准曲线计算出地西泮的含量。

5. 结果计算
地西泮的含量（mg/kg）=（样品中地西泮的峰面积或峰高/标准曲线斜率）×标准品浓度×稀释倍数×提取液体积/样品质量

6. 精密度和准确度
本方法的相对标准偏差（RSD）不大于10%，回收率在80%~120%之间。

相关标准
GB/T 5009.199-2017 食品中地西泮的测定 气相色谱法
GB/T 23531-2009 饲料中地西泮的测定 气相色谱法
GB/T 23532-2009 饲料中地西泮的测定 液相色谱法
GB/T 23533-2009 饲料中地西泮的测定 毛细管气相色谱法
GB/T 23534-2009 饲料中地西泮的测定 毛细管电泳法