畜禽产品是人们日常生活中不可或缺的食品之一,而其中的大肠菌群是一种常见的致病菌,对人体健康造成威胁。因此,对畜禽产品中的大肠菌群进行快速测定具有重要意义。本标准旨在规范畜禽产品大肠菌群快速测定的方法和要求,以保障人们的食品安全。
1.范围
本标准适用于畜禽产品中大肠菌群的快速检测。
2.设备和试剂
2.1 设备
(1)恒温水浴器
(2)离心机
(3)显微镜
(4)比色计
(5)移液器
(6)微孔板
(7)紫外分光光度计
2.2 试剂
(1)大肠杆菌培养基
(2)氯化钠
(3)硫酸铵
(4)硫酸铜
(5)硝酸银
(6)硝酸钠
(7)硝酸钾
(8)硝酸铋钾
(9)硝酸铋
(10)硝酸亚铁
(11)硫酸亚铁
(12)硫酸锌
(13)硫酸镁
(14)硫酸钠
(15)硫酸铝钾
(16)硫酸铝
(17)氢氧化钠
(18)氢氧化钾
(19)氢氧化铝
(20)氢氧化钠-氢氧化铝缓冲液
(21)氯化钠-硫酸铝缓冲液
(22)氯化钠-硫酸铝-硫酸铵缓冲液
(23)氯化钠-硫酸铝-硫酸铵-硫酸铜缓冲液
3.样品处理
3.1 样品的采集和处理应符合相关标准的要求。
3.2 样品的处理应在无菌条件下进行。
4.操作步骤
4.1 样品的制备
(1)将样品称取5g,加入50mL的大肠杆菌培养基中,振荡混合均匀。
(2)将样品在37℃恒温水浴器中孵育18-24h。
4.2 大肠菌群的检测
(1)将培养液离心,去除上清液,留下沉淀。
(2)加入氯化钠-硫酸铝-硫酸铵-硫酸铜缓冲液,振荡混合均匀。
(3)加入硝酸银试剂,振荡混合均匀。
(4)加入硝酸亚铁试剂,振荡混合均匀。
(5)加入硫酸亚铁试剂,振荡混合均匀。
(6)加入硫酸锌试剂,振荡混合均匀。
(7)加入硫酸镁试剂,振荡混合均匀。
(8)加入硫酸铝钾试剂,振荡混合均匀。
(9)加入氢氧化钠-氢氧化铝缓冲液,振荡混合均匀。
(10)加入氯化钠-硫酸铝缓冲液,振荡混合均匀。
(11)加入氯化钠-硫酸铝-硫酸铵缓冲液,振荡混合均匀。
(12)加入氯化钠-硫酸铝-硫酸铵-硫酸铜缓冲液,振荡混合均匀。
(13)加入氢氧化钾试剂,振荡混合均匀。
(14)加入氢氧化铝试剂,振荡混合均匀。
(15)加入氯化钠-硫酸铝-硫酸铵-硫酸铜缓冲液,振荡混合均匀。
(16)加入氯化钠-硫酸铝-硫酸铵缓冲液,振荡混合均匀。
(17)加入氯化钠-硫酸铝缓冲液,振荡混合均匀。
(18)加入氯化钠缓冲液,振荡混合均匀。
(19)加入氯化钠-硫酸铝-硫酸铵-硫酸铜缓冲液,振荡混合均匀。
(20)加入氯化钠-硫酸铝-硫酸铵缓冲液,振荡混合均匀。
(21)加入氯化钠-硫酸铝缓冲液,振荡混合均匀。
(22)加入氯化钠缓冲液,振荡混合均匀。
(23)加入氯化钠-硫酸铝-硫酸铵-硫酸铜缓冲液,振荡混合均匀。
(24)加入氯化钠-硫酸铝-硫酸铵缓冲液,振荡混合均匀。
(25)加入氯化钠-硫酸铝缓冲液,振荡混合均匀。
(26)加入氯化钠缓冲液,振荡混合均匀。
(27)将混合液转移到微孔板中,用比色计测定吸光度值。
(28)根据吸光度值计算大肠菌群的数量。
5.结果的判定
5.1 根据吸光度值计算大肠菌群的数量。
5.2 根据相关标准的要求,判定样品是否合格。
6.质量控制
6.1 采用内标法进行质量控制。
6.2 每批样品应设置空白对照、阴性对照和阳性对照。
相关标准
GB/T 4789.3-2016 食品微生物学检验 大肠菌群的检验
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范
GB/T 191-2008 包装、装运、储存标志和说明
GB/T 6682-2012 分析化学实验室水质规范
GB/T 5009.3-2016 食品中营养成分的测定 粗蛋白质的测定