一、范围
本标准适用于生鲜牛乳及其制品中碱性磷酸酶活度的测定。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室水质规范及评价标准
GB/T 5009.6 食品中磷酸酶测定
GB/T 5009.7 食品中碱性磷酸酶测定

三、定义
3.1 碱性磷酸酶
碱性磷酸酶是一种酶类，广泛存在于动植物细胞中，是一种催化磷酸酯水解的酶。

3.2 碱性磷酸酶活度
碱性磷酸酶活度是指单位时间内单位体积样品中碱性磷酸酶所催化的底物水解的量。

四、原理
样品中的碱性磷酸酶催化底物水解，生成黄色产物，其吸光度与碱性磷酸酶活度成正比。

五、仪器和设备
5.1 恒温水浴器
5.2 离心机
5.3 分光光度计

六、试剂和材料
6.1 0.1mol/L磷酸盐缓冲液
6.2 0.1mol/L苯酚酞溶液
6.3 0.1mol/L氢氧化钠溶液
6.4 0.1mol/L硫酸钠溶液
6.5 生鲜牛乳或其制品样品

七、操作步骤
7.1 取适量样品，加入0.1mol/L磷酸盐缓冲液，pH值调至7.5左右。
7.2 加入0.1mol/L苯酚酞溶液，混匀。
7.3 加入0.1mol/L氢氧化钠溶液，混匀。
7.4 在37℃恒温水浴器中孵育10min。
7.5 加入0.1mol/L硫酸钠溶液，混匀。
7.6 离心10min，取上清液，测定其吸光度。
7.7 以0.1mol/L磷酸盐缓冲液作空白对照，分别测定样品和对照的吸光度。

八、计算
8.1 根据吸光度计算样品中碱性磷酸酶活度。
8.2 碱性磷酸酶活度的计算公式为：
A=ΔA/min×V/ε×V1
其中，A为碱性磷酸酶活度，ΔA/min为单位时间内吸光度变化值，V为总体积，ε为苯酚酞的摩尔吸光系数，V1为样品体积。

九、结果表示
结果应报告样品中碱性磷酸酶活度的数值，单位为U/mL。

十、精密度和准确度
10.1 精密度
在同一实验室内，重复测定同一样品，相对标准偏差不应大于10%。
10.2 准确度
本方法的准确度应符合GB/T 6682的规定。

十一、质量控制
11.1 重复测定同一样品，相对标准偏差不应大于10%。
11.2 本方法的准确度应符合GB/T 6682的规定。

十二、报告
报告应包括以下内容：
12.1 样品名称或编号；
12.2 测定结果；
12.3 测定方法；
12.4 实验条件；
12.5 操作步骤；
12.6 结果计算方法；
12.7 精密度和准确度；
12.8 分析人员和审核人员的签名。

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