NY/T 3753-2020
甘薯品种真实性鉴定 SSR分子标记法
发布时间:2020-11-12 实施时间:2021-04-01
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甘薯是我国重要的经济作物之一,其品种繁多,但由于甘薯的繁殖方式多样,品种真实性鉴定一直是甘薯生产和科研中的难点问题。为了解决这一问题,本标准制定了甘薯品种真实性鉴定的SSR分子标记法。
1.样品采集
样品采集应选择健康、生长良好的甘薯植株,从植株的叶片、茎、根等部位采集样品。采集的样品应立即放入干燥的密闭袋中,避免阳光直射和高温。
2.DNA提取
样品采集后,应立即进行DNA提取。DNA提取方法可以选择商用DNA提取试剂盒,也可以采用自制试剂进行提取。提取的DNA应经过纯化和浓缩,以保证后续PCR扩增的质量。
3.PCR扩增
PCR扩增是甘薯品种真实性鉴定的关键步骤。本标准选用SSR分子标记法进行PCR扩增。PCR反应体系包括模板DNA、引物、Taq酶、dNTPs等。PCR反应条件为:预变性95℃ 5min,变性94℃ 30s,退火55℃ 30s,延伸72℃ 30s,共35个循环。PCR扩增后,应进行电泳分析。
4.电泳分析
PCR扩增产物经过电泳分析,可以得到甘薯品种的DNA指纹图谱。电泳分析条件为:电泳电压120V,电泳时间2h。分析结果应进行记录和分析,以确定甘薯品种的真实性。
相关标准:
GB/T 20481-2006 甘薯品种分类和命名
GB/T 20482-2006 甘薯品种资源调查和收集
GB/T 20483-2006 甘薯品种鉴定方法
GB/T 20484-2006 甘薯品种保藏和利用
GB/T 20485-2006 甘薯品种质量检验方法