甘蔗是一种重要的经济作物，其品种的真实性鉴定对于保护品种权益、促进品种改良和推广具有重要意义。SSR分子标记法是一种常用的分子生物学技术，具有高度的多态性和稳定性，被广泛应用于植物品种鉴定、遗传多样性分析等领域。本标准旨在规范甘蔗品种真实性鉴定的SSR分子标记方法，以提高鉴定结果的准确性和可靠性。

1.范围
本标准适用于甘蔗品种真实性鉴定的SSR分子标记法。

2.引用标准
GB/T 191-2008 线性尺寸测量用量规
GB/T 8170-2008 数字化处理的数据尺度和分辨率
GB/T 12346-2006 生物技术术语
GB/T 14233.1-2008 环境条件与测试程序的基本规定 第1部分：环境条件（IEC 60068-1:2007，MOD）
GB/T 14233.2-2005 环境条件与试验程序的基本规定 第2部分：试验程序（IEC 60068-2:2005，MOD）

3.术语和定义
3.1 甘蔗品种真实性鉴定
指通过分子生物学技术等手段，对甘蔗品种进行鉴定，以确定其品种的真实性。
3.2 SSR分子标记
简单重复序列（Simple Sequence Repeat，SSR）是一种广泛存在于生物基因组中的DNA序列，其长度通常在1-6个碱基对之间，具有高度的多态性和稳定性。SSR分子标记是利用PCR扩增SSR位点，通过电泳分析等方法对不同品种的DNA样品进行比较，以确定其品种的真实性。

4.样品采集
4.1 样品选择
选择健康、生长良好、无病虫害的甘蔗植株，采集新鲜叶片或嫩茎，避免采集老化、病变或死亡的组织。
4.2 样品处理
将采集的样品放入冰箱或液氮中保存，避免样品腐烂或变质。

5.DNA提取
5.1 样品研磨
将样品取出，用液氮研磨成粉末状，加入提取液中，混匀后放置于65℃水浴中静置10min。
5.2 DNA提取
将样品提取液离心，取上清液，加入等体积的氯仿-异丙醇（24:1）混匀，离心后取上清液，加入等体积的冷乙醇，混匀后放置于-20℃冷冻箱中沉淀DNA，离心后弃上清液，用70%乙醇洗涤DNA沉淀，离心后弃上清液，将DNA沉淀用TE缓冲液重悬。

6.PCR扩增
6.1 引物设计
根据已知的甘蔗SSR位点序列，设计适合的引物对，以保证扩增产物的特异性和稳定性。
6.2 PCR反应体系
PCR反应体系如下表所示：

6.3 PCR反应程序
PCR反应程序如下表所示：

7.电泳分析
7.1 样品制备
将PCR扩增产物与等体积的载体溶液混匀，加入适量的荧光素标记，混匀后加入等体积的甲醇，混匀后离心，取上清液，加入等体积的载体溶液，混匀后离心，取上清液，加入等体积的甲醇，混匀后离心，取上清液，将样品用电泳样品缓冲液重悬。
7.2 电泳条件
电泳条件如下表所示：

8.结果分析
根据电泳图谱，对PCR扩增产物进行分析，以确定甘蔗品种的真实性。

相关标准
GB/T 12346-2006 生物技术术语
GB/T 14233.1-2008 环境条件与测试程序的基本规定 第1部分：环境条件（IEC 60068-1:2007，MOD）
GB/T 14233.2-2005 环境条件与试验程序的基本规定 第2部分：试验程序（IEC 60068-2:2005，MOD）
GB/T 191-2008 线性尺寸测量用量规
GB/T 8170-2008 数字化处理的数据尺度和分辨率