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水果及其制品中L-苹果酸和D-苹果酸的测定是对水果及其制品质量的重要指标之一。本标准采用高效液相色谱法进行测定，具有准确、快速、灵敏度高等优点。

1.范围
本标准适用于水果及其制品中L-苹果酸和D-苹果酸的测定。

2.仪器和设备
2.1 高效液相色谱仪
2.2 色谱柱：C18色谱柱
2.3 称量仪
2.4 超声波清洗仪
2.5 离心机

3.试剂和材料
3.1 甲醇
3.2 乙腈
3.3 磷酸二氢钾
3.4 磷酸氢二钠
3.5 水
3.6 标准品：L-苹果酸和D-苹果酸

4.操作步骤
4.1 样品制备
将样品取适量，加入甲醇中超声波清洗10分钟，离心后取上清液，过滤后取10μL加入色谱柱中进行分析。
4.2 标准曲线制备
取L-苹果酸和D-苹果酸标准品，分别加入甲醇中制备不同浓度的标准溶液，分别进行高效液相色谱分析，得到标准曲线。
4.3 样品分析
将样品加入色谱柱中进行分析，根据标准曲线计算出L-苹果酸和D-苹果酸的含量。

5.结果计算
样品中L-苹果酸和D-苹果酸的含量分别用下式计算：
L-苹果酸含量（mg/kg）=（L-苹果酸峰面积/内标峰面积）×内标浓度×稀释倍数×1000
D-苹果酸含量（mg/kg）=（D-苹果酸峰面积/内标峰面积）×内标浓度×稀释倍数×1000

6.质量控制
6.1 标准品的制备和保存应符合相关规定。
6.2 样品的制备和分析应按照标准要求进行。
6.3 仪器的校准和维护应按照相关规定进行。

相关标准：
GB/T 5009.5-2016 食品中酸度的测定
GB/T 5009.8-2016 食品中总酸的测定
GB/T 5009.9-2016 食品中有机酸的测定
GB/T 5009.10-2016 食品中氨基酸的测定
GB/T 5009.11-2016 食品中维生素C的测定