小麦是我国重要的粮食作物之一,其品种真实性鉴定对于保障粮食安全、促进农业可持续发展具有重要意义。DNA分子标记技术是一种快速、准确、可靠的品种鉴定方法,其中SNP标记法是一种常用的DNA分子标记技术。
SNP(Single Nucleotide Polymorphism)是指单核苷酸多态性,是DNA序列中最常见的变异形式。SNP标记法是通过PCR技术扩增目标DNA片段,然后通过电泳分析检测PCR产物中的SNP位点,从而实现品种鉴定和遗传多样性分析。
本标准规定了小麦品种真实性鉴定的SNP标记法,具体步骤如下:
1. 样品采集:从小麦叶片、茎、根等组织中采集样品,将样品放入2mL离心管中,标注样品编号。
2. DNA提取:采用CTAB法或商用DNA提取试剂盒提取样品DNA。
3. PCR扩增:根据所选SNP位点设计引物,进行PCR扩增。PCR反应体系为25μL,包括2.5μL 10×PCR缓冲液、2.0μL 2.5mM dNTPs、0.5μL 10μM引物、0.25μL Taq DNA聚合酶、1μL DNA模板和18.75μL ddH2O。PCR反应条件为:94℃预变性5min,94℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸30s,共35个循环,最后72℃延伸10min。
4. 电泳分析:将PCR产物进行电泳分析,检测SNP位点的差异。电泳条件为:电压120V,电泳时间30min,使用1%琼脂糖凝胶。
相关标准
GB/T 19479-2004 小麦品种鉴定方法
GB/T 19480-2004 小麦品种纯度检验方法
GB/T 19481-2004 小麦品种品质检验方法
GB/T 19482-2004 小麦品种耐逆性鉴定方法
GB/T 19483-2004 小麦品种抗病性鉴定方法