群禽腺病毒是一种广泛存在于禽类、野生鸟类、鸽类等动物中的病毒,能引起禽类的呼吸道、消化道、神经系统等多种疾病。为了及时发现和控制群禽腺病毒的传播,需要对禽类等动物进行定期检测。本标准规定了群禽腺病毒检测方法,以便于动物疾病的防控。
1. 检测原理
本标准采用PCR和ELISA两种方法进行群禽腺病毒的检测。
PCR方法:利用PCR扩增群禽腺病毒的特异性DNA序列,通过荧光探针实时检测PCR产物的扩增情况,从而判断样品中是否存在群禽腺病毒。
ELISA方法:利用特异性抗体与群禽腺病毒抗原结合,形成抗原-抗体复合物,再加入酶标记的二抗,通过底物的反应,使酶标记的产物呈现颜色,从而判断样品中是否存在群禽腺病毒。
2. 检测步骤
PCR方法:
(1)提取样品中的DNA。
(2)设置PCR反应体系,包括特异性引物、荧光探针等。
(3)进行PCR扩增反应。
(4)实时监测PCR扩增产物的荧光信号。
(5)根据荧光信号判断样品中是否存在群禽腺病毒。
ELISA方法:
(1)制备群禽腺病毒抗原。
(2)将抗原涂覆在酶标板上。
(3)加入样品和特异性抗体。
(4)加入酶标记的二抗。
(5)加入底物,使酶标记的产物呈现颜色。
(6)根据颜色的深浅判断样品中是否存在群禽腺病毒。
3. 检测结果的判定
PCR方法:根据荧光信号的阈值判断样品中是否存在群禽腺病毒,荧光信号高于阈值为阳性,低于阈值为阴性。
ELISA方法:根据酶标板上颜色的深浅判断样品中是否存在群禽腺病毒,颜色深为阳性,浅为阴性。
4. 检测灵敏度和特异性
本标准要求PCR方法的检测灵敏度不低于10拷贝/μL,ELISA方法的检测灵敏度不低于1:128。同时,本标准要求两种方法的特异性不低于99%。
相关标准
GB/T 22470-2008 动物病毒学检验通则
NY/T 1491-2007 禽流感病毒检测方法
NY/T 1492-2007 禽腺病毒检测方法
NY/T 1493-2007 禽副流感病毒检测方法
NY/T 1494-2007 禽传染性支气管炎病毒检测方法