一、范围
本标准适用于烟用添加剂中马兜铃酸A的测定。

二、引用标准
GB/T 601-2007 化学试剂 分析试剂
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范
GB/T 8170-2008 数字表示法和圆整规则
GB/T 21932-2008 烟草及其制品中马兜铃酸A的测定 高效液相色谱法

三、仪器设备
1. 高效液相色谱仪：具有紫外检测器和荧光检测器，能够进行梯度洗脱。
2. 色谱柱：C18色谱柱，5μm，250mm×4.6mm。
3. 称量仪：精度为0.1mg。
4. 超声波清洗仪：功率为100W。

四、试剂和材料
1. 马兜铃酸A标准品：纯度≥98%。
2. 甲醇：色谱纯。
3. 乙腈：色谱纯。
4. 磷酸二氢钾：分析纯。
5. 磷酸氢二钠：分析纯。
6. 离子交换水：电阻率≥18MΩ·cm。

五、样品处理
1. 取样：将烟用添加剂样品取1g，精确称量。
2. 超声波清洗：将样品加入50mL离子交换水中，超声波清洗10min，离心10min，取上清液。
3. 过滤：将上清液过滤，取滤液备用。

六、操作步骤
1. 色谱条件
流动相：甲醇-乙腈-0.05%磷酸二氢钾溶液（30:70:0.1，V/V/V）。
流速：1.0mL/min。
柱温：30℃。
检测波长：280nm（紫外检测器），360nm（荧光检测器）。
进样量：10μL。
2. 标准曲线制备
取马兜铃酸A标准品0.1mg/mL的甲醇溶液，分别稀释为0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0μg/mL的标准溶液，用色谱法测定各浓度下的峰面积，绘制标准曲线。
3. 样品测定
用色谱法测定样品中马兜铃酸A的含量，计算样品中马兜铃酸A的质量浓度。

七、计算方法
样品中马兜铃酸A的质量浓度（mg/kg）=（样品中马兜铃酸A的峰面积/标准曲线斜率）×（标准品的质量浓度/样品的质量）

八、结果表示
结果保留3位有效数字。

九、质量控制
1. 标准曲线的线性范围：0.01～1.0μg/mL。
2. 标准曲线的相关系数：≥0.999。
3. 标准品的回收率：95%～105%。
4. 样品的加标回收率：80%～120%。

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GB/T 12496.1-2009 烟草制品中添加剂的分类和命名 第1部分：烟用添加剂