烟草及烟草制品中蛋白质的测定是烟草工业中的一个重要指标。本标准采用连续流动法测定烟草及烟草制品中蛋白质的含量。

1. 原理
样品经过酸水解后，产生氨基酸，氨基酸与酸性染料结合形成复合物，复合物在特定波长下吸光度最大，根据吸光度值计算出样品中蛋白质的含量。

2. 仪器和设备
（1）连续流动分析仪
（2）分光光度计
（3）恒温水浴器
（4）电子天平
（5）pH计

3. 试剂和材料
（1）硫酸
（2）氢氧化钠
（3）酸性染料
（4）标准氨基酸溶液
（5）烟草或烟草制品样品

4. 操作步骤
（1）样品制备：取适量烟草或烟草制品样品，粉碎后称取0.5g，加入10mL 6mol/L HCl，放入恒温水浴器中加热水解2小时，冷却后加入10mL 6mol/L NaOH，调节pH至7.0-7.5，加入适量酸性染料，加入适量标准氨基酸溶液，加入适量去离子水，调节pH至7.0-7.5，制成总体积为50mL的样品溶液。
（2）仪器调试：按照仪器说明书进行调试。
（3）测定：将样品溶液注入连续流动分析仪中，根据仪器说明书进行测定，记录吸光度值。
（4）计算：根据吸光度值计算出样品中蛋白质的含量。

5. 结果计算
样品中蛋白质的含量计算公式为：
C=（A-B）/K
其中，C为样品中蛋白质的含量，mg/g；
A为样品溶液的吸光度值；
B为空白溶液的吸光度值；
K为标准氨基酸溶液中蛋白质的含量，mg/mL。

6. 精密度和准确度
本方法的相对标准偏差（RSD）不应大于5%。

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