游离态甾醇是一类重要的生物活性物质，广泛存在于植物中，包括烟草。烟草中的游离态甾醇对人体健康有一定的影响，因此对其含量进行测定具有重要意义。

本标准采用高效液相色谱—串联质谱法进行测定。该方法具有灵敏度高、准确度高、重现性好等优点。具体操作步骤如下：

1. 样品制备
将烟草或烟草制品样品加入甲醇中，超声提取30分钟，离心后取上清液，用氮气吹干，再用甲醇重溶。

2. 色谱条件
使用C18色谱柱，流动相为甲醇-水（含0.1%甲酸），梯度洗脱，流速为0.3 mL/min。

3. 质谱条件
采用电喷雾离子源（ESI），多反应监测模式（MRM）进行检测。

4. 定量方法
根据游离态甾醇的峰面积与内标峰面积的比值，通过外标法计算出游离态甾醇的含量。

本标准适用于烟草及烟草制品中游离态甾醇的测定。

相关标准
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