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蛋白酶是一类能够水解蛋白质的酶，广泛存在于生物体内。蛋白酶活力是指单位时间内酶解蛋白质的能力，是评价蛋白酶制剂质量的重要指标之一。本标准介绍了蛋白酶活力测定的方法。

1. 原理
本标准采用菜豆酶为标准酶，以其对特定底物的酶解能力为参照，测定待测蛋白酶对同一底物的酶解能力。底物为N-α-benzoyl-L-arginine ethyl ester（BAEE），酶解产物为N-α-benzoyl-L-arginine（BA）。测定过程中，将待测酶与底物混合，反应一定时间后，加入酸停止反应，用紫外分光光度计测定产物的吸光度，计算出酶活力。

2. 仪器和试剂
2.1 1cm比色皿
2.2 紫外分光光度计
2.3 电子天平
2.4 0.1mol/L HCl
2.5 BAEE
2.6 菜豆酶

3. 操作步骤
3.1 准备工作
3.1.1 将菜豆酶溶液稀释至适宜的浓度，制备待测酶溶液。
3.1.2 精确称取BAEE，制备底物溶液。
3.1.3 将1cm比色皿清洗干净，用0.1mol/L HCl洗涤，再用去离子水冲洗干净，晾干备用。
3.2 实验操作
3.2.1 将0.1ml待测酶溶液加入1cm比色皿中。
3.2.2 加入0.9ml底物溶液，混匀。
3.2.3 在37℃恒温水浴中反应10min。
3.2.4 加入0.5ml 0.1mol/L HCl，停止反应。
3.2.5 用紫外分光光度计测定产物的吸光度，波长为253nm。
3.3 计算酶活力
3.3.1 以菜豆酶为标准酶，计算出其对BAEE的酶解速率。
3.3.2 以待测酶对BAEE的酶解速率为单位，计算出其酶活力。

4. 结果计算
4.1 计算标准酶对BAEE的酶解速率
标准酶对BAEE的酶解速率=ΔA253/min×体积/摩尔吸光系数×10^3
其中，ΔA253/min为标准酶对BAEE的吸光度变化速率，体积为标准酶溶液的体积，摩尔吸光系数为BA的摩尔吸光系数。
4.2 计算待测酶的酶活力
待测酶的酶活力=标准酶对BAEE的酶解速率×（ΔA253/min/待测酶溶液体积）
其中，ΔA253/min为待测酶对BAEE的吸光度变化速率，待测酶溶液体积为待测酶溶液的体积。

相关标准：
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范
GB/T 6688-2008 分析化学实验室安全规范
GB/T 6689-2008 分析化学实验室通用规范
GB/T 6690-2008 分析化学实验室玻璃仪器规范
GB/T 6691-2008 分析化学实验室仪器通用规范