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酸性橙染料是一种常用的食品着色剂，广泛应用于饮料、糖果、罐头等食品中。然而，酸性橙染料的过量使用会对人体健康造成危害，因此对其含量进行监测是非常必要的。本标准采用高效液相色谱法进行测定，具有灵敏度高、准确度高、重现性好等优点。

1. 原理
样品经过提取、过滤、稀释后，采用高效液相色谱法进行测定。在特定的色谱条件下，酸性橙染料与色谱柱中的固定相发生相互作用，从而实现分离和测定。

2. 仪器和设备
（1）高效液相色谱仪
（2）色谱柱：C18色谱柱
（3）紫外检测器：波长为480nm
（4）电子天平
（5）移液器、瓶塞、滤膜等

3. 试剂和材料
（1）甲醇：色谱纯
（2）乙腈：色谱纯
（3）磷酸二氢钾：分析纯
（4）磷酸氢二钠：分析纯
（5）水：去离子水或蒸馏水
（6）标准品：酸性橙染料标准品

4. 操作步骤
（1）样品制备：取适量样品，加入适量水，加热至沸腾，过滤，冷却后加入磷酸二氢钾溶液，调节pH值至5.0-5.5，用乙腈稀释至适宜浓度。
（2）色谱条件：流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长为480nm。
（3）标准曲线：取不同浓度的酸性橙染料标准品，按照上述方法进行测定，绘制标准曲线。
（4）样品测定：按照上述方法进行测定，计算样品中酸性橙染料的含量。

5. 结果计算
（1）标准曲线：将标准品的峰面积与浓度绘制成标准曲线，通过线性回归计算样品中酸性橙染料的含量。
（2）样品测定：将样品的峰面积代入标准曲线中，计算样品中酸性橙染料的含量。

相关标准：
GB/T 5009.60-2003 食品中酸性橙染料的测定
GB/T 5009.61-2003 食品中染料的检验
GB/T 18932.23-2002 饮料中染料的测定
GB/T 18932.24-2002 糖果中染料的测定
GB/T 18932.25-2002 罐头中染料的测定