一、范围
本标准适用于制革用加脂剂游离脂肪酸含量的测定。

二、引用标准
GB/T 601-2007 皮革、毛皮、人造革和其它制品试样的制备
GB/T 602-2007 皮革、毛皮、人造革和其它制品试样的制备
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价
GB/T 6688-2002 分析化学实验室安全规程
GB/T 8170-2008 产品标准通用术语

三、原理
将样品中的游离脂肪酸与酚酞反应生成带有颜色的络合物，根据络合物的吸光度测定游离脂肪酸含量。

四、仪器和设备
4.1 分光光度计：量程为0～1.0，准确度为0.001。
4.2 恒温水浴器：温度范围为50℃～60℃。
4.3 称量器：分度值为0.0001g。
4.4 滤纸：直径为11cm。

五、试剂和材料
5.1 氯仿：分析纯。
5.2 酚酞：分析纯。
5.3 乙醇：分析纯。
5.4 硫酸：分析纯。
5.5 氢氧化钠：分析纯。
5.6 氢氯酸：分析纯。
5.7 水：去离子水或等级为三级的水。
5.8 标准溶液：游离脂肪酸标准溶液。

六、样品的制备
6.1 取样：按照GB/T 601-2007或GB/T 602-2007的规定取样。
6.2 样品的制备：将样品中的游离脂肪酸提取出来，然后用氯仿洗涤，干燥后称取适量样品。

七、操作步骤
7.1 标准曲线的制备
7.1.1 取游离脂肪酸标准溶液0.1ml，加入50ml锥形瓶中，用氯仿定容至50ml，摇匀，得到游离脂肪酸浓度为2mg/L的标准溶液。
7.1.2 取游离脂肪酸标准溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml和1.0ml，分别加入50ml锥形瓶中，用氯仿定容至50ml，摇匀，得到游离脂肪酸浓度分别为0.04mg/L、0.08mg/L、0.16mg/L、0.24mg/L、0.32mg/L和0.4mg/L的标准溶液。
7.1.3 用分光光度计在λ=520nm处测定各标准溶液的吸光度，绘制标准曲线。

7.2 样品的测定
7.2.1 取样品0.1g，加入50ml锥形瓶中，加入氯仿10ml，振荡10min，离心分离，取上清液10ml，加入滤纸漏斗中滤过。
7.2.2 取上清液2ml，加入50ml锥形瓶中，加入酚酞溶液0.1ml，乙醇5ml，硫酸0.5ml，氢氧化钠溶液0.5ml，用氯仿定容至50ml，摇匀，放置10min。
7.2.3 用分光光度计在λ=520nm处测定吸光度A。
7.2.4 根据标准曲线计算游离脂肪酸含量。

八、计算
游离脂肪酸含量的计算公式为：
C=（A-B）/K
式中：
C——游离脂肪酸含量，mg/g；
A——样品的吸光度；
B——空白的吸光度；
K——标准曲线斜率，mg/L。

九、结果表示
游离脂肪酸含量应按照实际测定值计算，保留两位小数。

十、精密度和准确度
10.1 精密度：同一实验室内，用本方法测定同一样品，应重复3次，计算相对标准偏差，不应大于5%。
10.2 准确度：本方法的准确度应按照GB/T 6682-2008的规定进行评价。

相关标准
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