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鱼类是人们日常饮食中不可或缺的一种食品，而鱼类的新鲜程度对于其口感和营养价值有着至关重要的影响。因此，鱼类鲜度的检测成为了食品安全监管和质量控制的重要环节。鱼类鲜度指标K值是一种常用的鲜度评价指标，其值越大，表示鱼类的新鲜程度越高。本标准采用高效液相色谱法测定鱼类鲜度指标K值，具有准确、快速、简便等优点。

1.范围
本标准适用于鱼类及其制品的鲜度检测，包括鱼肉、鱼片、鱼丸、鱼饼等。

2.仪器和试剂
2.1 高效液相色谱仪
2.2 色谱柱：C18色谱柱
2.3 甲醇：色谱纯
2.4 乙腈：色谱纯
2.5 磷酸二氢钾：分析纯
2.6 磷酸氢二钠：分析纯
2.7 离心管：2mL

3.样品的处理
3.1 样品的准备
将样品取适量，去除骨刺、鳞片、内脏等杂质，然后将样品切成小块，用离心管装好，放入冰箱中冷藏。
3.2 样品的提取
取出冷藏的样品，加入等量的甲醇，用超声波处理器处理30min，然后离心10min，取上清液备用。

4.操作步骤
4.1 色谱柱的平衡
用磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲液（pH=3.0）平衡色谱柱，流速为1.0mL/min，直到基线稳定。
4.2 样品的进样
取上清液1μL进样，流速为1.0mL/min。
4.3 检测条件
柱温：30℃
检测波长：254nm
流动相：甲醇-乙腈（70:30）
4.4 计算K值
用公式计算K值：K=（A1-A2）/A1×100%
其中，A1为样品进样前的峰面积，A2为样品进样后的峰面积。

5.结果的计算与表达
将测得的K值按照小数点后两位四舍五入，保留两位有效数字，作为样品的鲜度指标K值。

相关标准：
GB/T 5009.228-2016 食品中氨基酸的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.229-2016 食品中脂肪酸甲酯的测定 气相色谱法
GB/T 5009.230-2016 食品中脂肪酸甲酯的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.231-2016 食品中脂肪酸甲酯的测定 液相色谱法
GB/T 5009.232-2016 食品中脂肪酸甲酯的测定 紫外分光光度法