对虾肝胰腺细小病毒病是由对虾肝胰腺细小病毒引起的一种病毒性疾病，主要危害对虾养殖业。为了及时、准确地诊断对虾肝胰腺细小病毒病，保障对虾养殖业的健康发展，本标准制定了对虾肝胰腺细小病毒病新鲜组织的T-E染色法的诊断方法。

1. 试剂和设备
1.1 甲醛
1.2 乙醇
1.3 氯仿
1.4 石蜡
1.5 溴甲烷
1.6 水
1.7 酸性酒精
1.8 甲苯
1.9 染色剂：伊红、光亮绿、甲基绿、伊红-光亮绿、伊红-甲基绿
1.10 显微镜
1.11 切片机
1.12 玻璃刀片
1.13 石英坩埚
1.14 热板

2. 标本的处理
2.1 取对虾肝胰腺组织，切成薄片，大小适宜。
2.2 用10%甲醛固定标本，固定时间不少于24小时。
2.3 用乙醇、氯仿、石蜡依次浸渍，制成石蜡切片。

3. 染色方法
3.1 石蜡切片用热板加热至60℃，刮去石蜡。
3.2 用水洗去石蜡切片上的残留物。
3.3 用酸性酒精脱色，时间不超过5秒。
3.4 用水洗去酸性酒精。
3.5 用伊红染色，时间不超过5分钟。
3.6 用水洗去伊红。
3.7 用光亮绿染色，时间不超过5分钟。
3.8 用水洗去光亮绿。
3.9 用甲基绿染色，时间不超过5分钟。
3.10 用水洗去甲基绿。
3.11 用伊红-光亮绿染色，时间不超过5分钟。
3.12 用水洗去伊红-光亮绿。
3.13 用伊红-甲基绿染色，时间不超过5分钟。
3.14 用水洗去伊红-甲基绿。
3.15 用溴甲烷脱色，时间不超过5分钟。
3.16 用水洗去溴甲烷。
3.17 用甲苯透明，封片。

4. 结果判定
4.1 对虾肝胰腺细小病毒病病毒颗粒呈红色或红色-绿色双染色。
4.2 病毒颗粒大小约为30-40nm，呈圆形或椭圆形，有时呈棒状。
4.3 病毒颗粒分布在肝胰腺组织的细胞质中。

相关标准
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GB/T 14938.2-2018 水生动物病原微生物检验方法 第2部分：病毒检验
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