SC/T 7206.3-2007
牡蛎单孢子虫病诊断规程 第3部分:原位杂交诊断法
发布时间:2007-06-14 实施时间:2007-09-01
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牡蛎单孢子虫病是一种常见的牡蛎疾病,由单孢子虫引起。该病在牡蛎养殖业中造成了严重的经济损失。为了及时、准确地诊断该病,保障牡蛎养殖业的健康发展,本标准制定了牡蛎单孢子虫病原位杂交诊断方法的要求和操作步骤。
1. 试剂和设备
1.1 原位杂交试剂盒
1.2 荧光显微镜
1.3 离心机
1.4 恒温水浴器
1.5 离心管
1.6 玻璃片
1.7 石蜡切片机
2. 操作步骤
2.1 样品制备
将牡蛎组织样品切片,厚度为4-6μm,用甲醛固定,然后用乙醇逐级脱水,最后用xylene透明处理,制备石蜡切片。
2.2 原位杂交
将制备好的石蜡切片放入离心管中,加入适量的蛋白酶K和蛋白酶K缓冲液,在37℃下消化30分钟。然后用PBS洗涤3次,每次5分钟。加入适量的脱水乙醇,离心去除液体,用空气吹干。加入适量的杂交液,将离心管放入恒温水浴器中,进行杂交反应。反应结束后,用PBS洗涤3次,每次5分钟。加入适量的荧光标记探针,放入荧光显微镜中观察。
2.3 结果判定和报告
观察荧光显微镜中的结果,根据标准判定结果是否阳性或阴性。将结果记录在报告中。
相关标准:
GB/T 1962.1-2001 牡蛎单孢子虫病诊断规程 第1部分:病原学检查
GB/T 1962.2-2001 牡蛎单孢子虫病诊断规程 第2部分:免疫学检查
GB/T 1962.4-2001 牡蛎单孢子虫病诊断规程 第4部分:分子生物学检查
GB/T 1962.5-2001 牡蛎单孢子虫病诊断规程 第5部分:病理学检查
GB/T 1962.6-2001 牡蛎单孢子虫病诊断规程 第6部分:细胞学检查