蜂王浆是蜜蜂分泌的一种特殊的分泌物，具有多种保健功效，被广泛应用于保健品和化妆品等领域。然而，蜂王浆中可能存在苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸酯等有害物质，对人体健康造成潜在威胁。因此，对蜂王浆中有害物质的检测显得尤为重要。

本标准采用液相色谱法进行检测，具体操作如下：

1. 仪器和试剂

（1）高效液相色谱仪：包括泵、进样器、柱温箱、检测器等。

（2）色谱柱：C18色谱柱，长度为250mm，内径为4.6mm，颗粒度为5μm。

（3）移液器：1mL、10mL。

（4）量筒：10mL、50mL。

（5）瓶塞：用于密封瓶口。

（6）甲醇：色谱纯。

（7）乙腈：色谱纯。

（8）磷酸二氢钾：分析纯。

（9）磷酸：分析纯。

（10）超纯水：用于制备溶液。

2. 样品的制备

取适量的蜂王浆样品，加入等体积的甲醇，振荡混合，离心沉淀，取上清液过滤，即得待测样品。

3. 色谱条件

（1）流动相：甲醇-0.05%磷酸二氢钾水溶液（70:30）。

（2）流速：1.0mL/min。

（3）柱温：30℃。

（4）检测波长：254nm。

4. 操作步骤

（1）开机预热：打开高效液相色谱仪电源，预热30min。

（2）制备标准曲线：取苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸酯标准品，分别加入甲醇中制备浓度为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mg/L的标准溶液，以0.45μm的滤膜过滤，进样后进行检测，绘制标准曲线。

（3）样品检测：取适量的待测样品，加入甲醇中制备浓度为0.1mg/L的样品溶液，以0.45μm的滤膜过滤，进样后进行检测。

5. 结果计算

根据标准曲线计算待测样品中苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸酯的含量。

相关标准
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