甘蔗是我国重要的经济作物之一,但流胶病菌的侵染会导致甘蔗产量下降,严重影响甘蔗产业的发展。为了保障甘蔗产业的健康发展,需要对甘蔗进行流胶病菌检疫鉴定。本标准就是为了规范甘蔗流胶病菌检疫鉴定方法而制定的。
1 范围
本标准适用于甘蔗流胶病菌检疫鉴定。
2 试验材料和设备
2.1 试验材料
(1)甘蔗样品
(2)蒸馏水
(3)无菌培养基
(4)生理盐水
(5)甲醇
(6)碘酸钾
(7)石蜡切片
(8)甘油
2.2 试验设备
(1)显微镜
(2)无菌操作台
(3)恒温培养箱
(4)离心机
(5)平板计数器
3 试验方法
3.1 样品采集和处理
(1)采集样品时,应选择疑似感染流胶病菌的甘蔗叶片、茎秆等组织,避免选择有机磷农药残留的样品。
(2)样品采集后,应立即送至实验室进行处理。
(3)样品处理前,应先用生理盐水清洗,去除表面的污物和杂质。
(4)将样品切成小块,用蒸馏水浸泡30分钟,然后用无菌纱布过滤,得到悬浮液。
3.2 菌落分离
(1)将悬浮液分别接种在无菌培养基上,放入恒温培养箱中,培养24小时。
(2)观察培养基上是否有菌落生长,如果有,则进行单菌落分离。
(3)将单菌落接种在新的无菌培养基上,继续培养24小时。
3.3 鉴定
(1)将培养基上的菌落取出,用生理盐水洗涤,制成石蜡切片。
(2)将石蜡切片放在显微镜下观察,观察菌落形态、大小、颜色等特征。
(3)用甲醇和碘酸钾染色,观察菌落内部结构。
(4)根据菌落形态、大小、颜色和内部结构等特征,鉴定是否为流胶病菌。
4 结果判定
(1)如果样品中检测到流胶病菌,则判定为阳性。
(2)如果样品中未检测到流胶病菌,则判定为阴性。
5 结论报告
(1)报告应包括样品来源、采集时间、检测方法、结果等内容。
(2)报告应由专业人员签字确认。
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