有毒生物胺是一类常见的有毒物质，常见于鱼类、贝类等水产品中。其摄入量过多会对人体健康造成危害，因此对水产品中有毒生物胺的检测十分重要。本标准采用高效液相色谱法测定组胺、亚硝酸盐、亚硝基二甲胺、亚硝基三甲胺、亚硝基四甲胺、苯乙胺、N-乙酰组胺、N,N-二乙酰组胺、N-乙酰苯胺、N,N-二乙酰苯胺的含量。

1. 原理
样品经提取后，经过固相萃取柱净化，再经过高效液相色谱仪检测。检测时采用梯度洗脱，以乙腈-水为流动相，采用紫外检测器检测。

2. 仪器和设备
2.1 高效液相色谱仪
2.2 固相萃取柱
2.3 离心机
2.4 超声波清洗器
2.5 称量器
2.6 紫外检测器

3. 试剂和材料
3.1 甲醇
3.2 乙腈
3.3 水
3.4 硫酸
3.5 氢氧化钠
3.6 氯化钠
3.7 氯仿
3.8 硝酸钠
3.9 磷酸二氢钾
3.10 磷酸氢二钠
3.11 硫酸铵
3.12 硫酸钠
3.13 甲酸
3.14 乙酸
3.15 乙酸乙酯
3.16 乙酸乙酯-甲醇（1:1，体积比）
3.17 乙酸乙酯-甲醇（9:1，体积比）
3.18 标准品

4. 操作步骤
4.1 样品制备
将样品称取适量，加入氯仿中，超声波清洗10分钟，离心分离，取上清液，加入硫酸钠，离心分离，取上清液，加入磷酸二氢钾，离心分离，取上清液，加入磷酸氢二钠，离心分离，取上清液，加入硫酸铵，离心分离，取上清液，加入甲酸，离心分离，取上清液，加入乙酸，离心分离，取上清液，加入乙酸乙酯-甲醇（1:1，体积比），离心分离，取上清液，加入乙酸乙酯-甲醇（9:1，体积比），离心分离，取上清液，过滤，即为样品制备液。
4.2 标准品制备
将标准品称取适量，加入甲酸，超声波清洗10分钟，离心分离，取上清液，加入乙酸，离心分离，取上清液，加入乙酸乙酯-甲醇（1:1，体积比），离心分离，取上清液，加入乙酸乙酯-甲醇（9:1，体积比），离心分离，取上清液，过滤，即为标准品制备液。
4.3 检测
将样品制备液和标准品制备液注入高效液相色谱仪，采用梯度洗脱，以乙腈-水为流动相，采用紫外检测器检测。

5. 结果计算
根据标准品的峰面积和浓度制作标准曲线，根据样品的峰面积和标准曲线计算出样品中有毒生物胺的含量。

相关标准
GB 5009.228-2016 食品中亚硝酸盐的测定
GB 5009.229-2016 食品中亚硝基二甲胺和亚硝基三甲胺的测定
GB 5009.230-2016 食品中亚硝基四甲胺的测定
GB 5009.231-2016 食品中组胺的测定
GB 31604.47-2016 进出口水产品中有毒生物胺的检测方法