:
青椒是我国重要的蔬菜之一,但是随着转基因技术的发展,转基因青椒的出现引起了人们的关注。为了保障消费者的权益,需要对青椒中的转基因成分进行检测。本标准就是为了解决这个问题而制定的。
1.适用范围
本标准适用于青椒中转基因成分的定性PCR检测。
2.检测原理
本标准采用PCR技术,通过扩增靶基因的特异性序列来检测青椒中是否存在转基因成分。
3.试剂和仪器
3.1 试剂
PCR试剂盒、DNA提取试剂盒、DNA分子量标准品、PCR扩增引物、PCR扩增酶、PCR扩增缓冲液等。
3.2 仪器
PCR扩增仪、电泳仪等。
4.样品处理
4.1 样品采集
样品应在青椒成熟期采集,采集时应避免受到污染。
4.2 样品处理
将采集的样品洗净,去皮、去籽、切碎,然后用DNA提取试剂盒提取DNA。
5. PCR扩增反应
5.1 PCR扩增反应体系
PCR扩增反应体系如下表所示:
试剂名称 体积(μL)
DNA模板 1
PCR扩增酶 0.25
PCR扩增缓冲液 2.5
PCR扩增引物(10μmol/L) 0.5
dNTPs(2.5mmol/L) 0.5
ddH2O 至25μL
5.2 PCR扩增反应程序
PCR扩增反应程序如下表所示:
步骤 温度(℃) 时间(min)
初始变性 94 5
循环变性 94 30s
退火 55 30s
延伸 72 30s
终止延伸 72 10
6.电泳分析
将PCR扩增产物进行电泳分析,检测是否存在目标条带。
相关标准:
GB/T 28001-2011 转基因生物安全评价指南
GB/T 28000-2011 转基因生物检测方法
GB/T 28002-2011 转基因生物检测质量体系要求
GB/T 28003-2011 转基因生物检测实验室技术规范
GB/T 28004-2011 转基因生物检测结果判定标准