产黄曲霉毒素是一种常见的真菌毒素,对人体和动物健康有害。因此,对于食品、饲料、环境等样品中产黄曲霉毒素真菌的检测十分重要。本标准规定了一种PCR检测方法,可以快速、准确地检测样品中的产黄曲霉毒素真菌。
1. 范围
本标准适用于食品、饲料、环境等样品中产黄曲霉毒素真菌的检测。
2. 原理
本方法采用PCR技术,利用特异性引物扩增样品中的产黄曲霉毒素真菌DNA序列,通过电泳分析扩增产物的大小和数量,判断样品中是否存在产黄曲霉毒素真菌。
3. 试剂和仪器
3.1 试剂
PCR试剂盒、DNA提取试剂盒、电泳试剂盒等。
3.2 仪器
PCR仪、电泳仪等。
4. 样品处理
4.1 食品样品
取样品1g,加入10mL的PBS缓冲液,振荡混合,离心10min,取上清液,加入等体积的DNA提取试剂,按照试剂盒说明提取DNA。
4.2 饲料样品
取样品1g,加入10mL的PBS缓冲液,振荡混合,离心10min,取上清液,加入等体积的DNA提取试剂,按照试剂盒说明提取DNA。
4.3 环境样品
取样品1g,加入10mL的PBS缓冲液,振荡混合,离心10min,取上清液,加入等体积的DNA提取试剂,按照试剂盒说明提取DNA。
5. PCR扩增
按照PCR试剂盒说明进行PCR扩增,扩增条件如下:
预变性:95℃,5min
变性:95℃,30s
退火:55℃,30s
延伸:72℃,30s
循环30次
最终延伸:72℃,10min
6. 电泳分析
将PCR扩增产物进行电泳分析,分析条件如下:
电泳电压:120V
电泳时间:30min
电泳缓冲液:TAE缓冲液
电泳结果:分析PCR扩增产物的大小和数量,判断样品中是否存在产黄曲霉毒素真菌。
7. 结果判定
7.1 阳性结果
PCR扩增产物大小和数量符合阳性对照标准,判定样品中存在产黄曲霉毒素真菌。
7.2 阴性结果
PCR扩增产物大小和数量不符合阳性对照标准,判定样品中不存在产黄曲霉毒素真菌。
相关标准
GB/T 5009.22-2017 食品中黄曲霉毒素的测定 高效液相色谱法
GB/T 23530-2009 饲料中黄曲霉毒素的测定 高效液相色谱法
GB/T 18979-2003 环境空气中霉菌的采样和检测方法