一、范围
本标准适用于中药制剂中苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类防腐剂的检验。

二、仪器设备和试剂
1. 液相色谱仪：具有紫外检测器和反向相色谱柱。
2. 色谱柱：C18色谱柱，5μm，4.6mm×250mm。
3. 称量仪：精度为0.1mg。
4. 称量瓶：100ml。
5. 乙腈：色谱纯。
6. 磷酸二氢钾：分析纯。
7. 磷酸氢二钠：分析纯。
8. 纯水：经反渗透处理或等效处理。

三、操作步骤
1. 样品的制备
取样品1g，加入100ml的乙腈中，超声处理10min，离心10min，取上清液过滤，取滤液10ml，加入10ml的磷酸二氢钾溶液（0.05mol/L），振荡混合，用磷酸氢二钠溶液（0.05mol/L）调节pH至3.0±0.1，用纯水定容至50ml，混合均匀，过滤，取滤液5ml，即为试液。
2. 标准曲线的制备
取苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯标准品各0.1g，分别加入100ml的乙腈中，超声处理10min，离心10min，取上清液过滤，取滤液10ml，加入10ml的磷酸二氢钾溶液（0.05mol/L），振荡混合，用磷酸氢二钠溶液（0.05mol/L）调节pH至3.0±0.1，用纯水定容至50ml，混合均匀，过滤，取滤液5ml，即为标准液。取苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯标准品各5个不同浓度的标准液，分别为0.2、0.4、0.6、0.8和1.0mg/ml，用液相色谱法测定各浓度标准液的峰面积，绘制标准曲线。
3. 检测
将试液注入液相色谱仪，用标准曲线计算出苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯的含量。

四、结果计算
样品中苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯的含量，按下式计算：
C=（As/Ak）×Ck×V/（m×1000）
式中：
C——样品中苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯的含量，mg/g；
As——样品中苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯的峰面积；
Ak——标准曲线中苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯的峰面积；
Ck——标准曲线中苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯的浓度，mg/ml；
V——试液的定容体积，ml；
m——样品的质量，g。

五、质量控制
1. 标准品的制备应按照标准曲线的制备方法进行。
2. 每个样品应重复测定3次，取平均值作为结果。
3. 每个批次样品应设置空白对照组和质控样品组，空白对照组不加样品，质控样品组应加入已知浓度的标准品，进行测定，计算出相对标准偏差，其值应小于等于10%。

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