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蓝舌病是一种由蓝舌病病毒引起的急性传染病,主要感染反刍动物,如牛、羊、鹿等。该病在全球范围内广泛流行,对畜牧业造成了严重的经济损失。因此,对蓝舌病的检测和防控显得尤为重要。
竞争酶联免疫吸附试验(c-ELISA)是一种常用的蓝舌病病毒抗体检测方法。该方法通过竞争抗体与样品中的抗体结合,从而判断样品中是否存在蓝舌病病毒抗体。本标准规定了c-ELISA的操作规程,以确保检测结果的准确性和可靠性。
1.试验原理
c-ELISA是一种间接竞争ELISA方法。将样品中的抗体与酶标记抗体竞争结合于固相抗原上,通过比较样品与标准品的OD值,判断样品中是否存在蓝舌病病毒抗体。
2.试剂和设备
c-ELISA试剂包括固相抗原、酶标记抗体、样品稀释液、标准品、洗涤缓冲液、底物液等。设备包括酶标仪、洗板机、离心机等。
3.试验操作
(1)样品处理:将样品加入稀释液中,按照一定比例稀释,离心后取上清液作为检测样品。
(2)板涂覆:将固相抗原加入96孔板中,孵育后洗涤,加入酶标记抗体,孵育后洗涤。
(3)标准品加样:将标准品和样品加入孔中,孵育后洗涤。
(4)底物反应:加入底物液,孵育一定时间后停止反应。
(5)结果读取:使用酶标仪读取各孔的OD值。
4.结果判定
根据标准品的OD值和样品的OD值,计算出样品的抗体含量。根据抗体含量和判定标准,判断样品是否阳性或阴性。
相关标准:
GB/T 22470-2008 《动物疫病检验通用术语》
GB/T 22471-2008 《动物疫病检验方法通则》
GB/T 22472-2008 《动物疫病检验方法腺病毒检验》
GB/T 22473-2008 《动物疫病检验方法病毒性腹泻检验》
GB/T 22474-2008 《动物疫病检验方法狂犬病检验》