栗黑水疫霉病菌是一种危害极大的植物病原菌，能够引起栗树的根、茎、叶、果实等部位的病害，严重影响栗树的生长和产量。为了防止该病菌的传播和扩散，需要对栗黑水疫霉病菌进行检疫鉴定。本标准就是为了规范栗黑水疫霉病菌的检疫鉴定方法而制定的。

1.范围
本标准适用于栗黑水疫霉病菌的检疫鉴定。

2.样品采集
2.1 样品采集时间
在栗树生长期内，当栗树叶片出现病斑时，采集叶片样品。当果实成熟时，采集果实样品。当树干出现病斑时，采集树皮样品。当根部出现病斑时，采集根部样品。
2.2 样品采集方法
采用无菌铁钻或无菌剪刀采集样品，避免污染。

3.样品处理
3.1 样品处理前准备
将采集的样品放入无菌袋中，标明采样时间、采样地点、采样部位等信息。
3.2 样品处理方法
将样品表面用70%的酒精消毒，然后用无菌剪刀或无菌铁钻将样品切成小块，放入无菌离心管中。

4.分离
4.1 分离培养基
采用PDA培养基。
4.2 分离方法
将样品均匀涂抹在PDA培养基上，放入恒温培养箱中，温度为25℃，光照强度为3000lx，培养时间为3-5天。

5.鉴定
5.1 形态学鉴定
观察分离菌株的菌落形态、菌丝形态、孢子形态等特征，与栗黑水疫霉病菌的形态学特征进行比对。
5.2 生理生化鉴定
采用生理生化试验，如碳水化合物利用试验、氧化酶试验、酸碱反应试验等，与栗黑水疫霉病菌的生理生化特征进行比对。
5.3 分子生物学鉴定
采用PCR技术，对分离菌株进行鉴定，与栗黑水疫霉病菌的分子生物学特征进行比对。

相关标准
GB/T 16180-2018 植物检疫技术术语
GB/T 16181-2018 植物检疫标本采集、处理和保存规范
GB/T 16182-2018 植物检疫分离鉴定技术规范
GB/T 16183-2018 植物检疫生物学检测技术规范
GB/T 16184-2018 植物检疫分子检测技术规范