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国境口岸是我国对外开放的重要窗口，也是疫情传播的重要渠道。蚊类是西部马脑炎病毒的主要传播媒介，因此对蚊类进行检测是预防和控制疫情传播的重要措施。本标准旨在规定国境口岸蚊类携带西部马脑炎病毒的检测方法，以保障口岸安全和公共卫生。

1.范围
本标准适用于国境口岸蚊类携带西部马脑炎病毒的检测，采用RT-PCR法进行检测。

2.检测原理
采用RT-PCR法检测蚊类体内的西部马脑炎病毒RNA，通过扩增病毒RNA的特异性序列，检测样品中是否存在西部马脑炎病毒。

3.试剂和仪器
3.1 试剂
（1）RNA提取试剂盒
（2）RT-PCR试剂盒
（3）阳性对照品
（4）负性对照品
3.2 仪器
（1）高速离心机
（2）PCR仪
（3）电泳仪

4.样品采集和处理
4.1 样品采集
采集蚊类样品，将其放入离心管中，加入1ml RNA提取试剂，离心10min，将上清液转移到新的离心管中，加入异丙醇，离心10min，将上清液转移到新的离心管中，加入洗涤缓冲液，离心10min，将上清液转移到新的离心管中，加入去离子水，离心10min，将上清液转移到新的离心管中，即得到RNA提取物。

4.2 样品处理
将RNA提取物加入RT-PCR试剂盒中，进行RT-PCR扩增反应，扩增条件为：50℃反应10min，95℃反应5min，40个循环，每个循环包括95℃反应15s，55℃反应30s，72℃反应30s，最后72℃反应10min。

5.结果判定
5.1 阳性判定
扩增曲线呈S型，CT值小于40，且阳性对照品扩增曲线呈S型，CT值小于40。

5.2 负性判定
扩增曲线呈直线或无扩增曲线，且负性对照品扩增曲线呈直线或无扩增曲线。

6.结果报告
报告样品的检测结果，包括阳性或负性判定结果，以及CT值。

相关标准：
GB/T 4789.3-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
GB/T 5009.3-2016 食品安全国家标准 食品中灰霉菌毒素的测定 高效液相色谱法
GB/T 6682-2008 分析化学实验室通用规定
GB/T 191-2008 包装、储存和运输标志和标签通用规范
GB/T 2828.1-2012 抽样程序及表观质量检验的一般原则