白蛉是一种常见的昆虫，它们常常在国境口岸附近活动。白蛉携带的利什曼原虫是一种寄生虫，可以引起利什曼病。为了防止利什曼病在国境口岸传播，需要对白蛉进行检测。本标准规定了国境口岸白蛉携带利什曼原虫检测方法。

1. 适用范围
本标准适用于国境口岸对白蛉携带利什曼原虫的检测。

2. 仪器和试剂
2.1 PCR仪器
2.2 PCR试剂盒
2.3 DNA纯化试剂盒
2.4 离心机
2.5 紫外分光光度计

3. 样品采集
3.1 采集白蛉样品，每个样品包括一个白蛉。
3.2 将白蛉放入1.5mL离心管中，加入200μL的PBS缓冲液。
3.3 用离心机离心5分钟，去除上清液。
3.4 加入200μL的DNA纯化试剂盒，混匀。
3.5 用离心机离心5分钟，去除上清液。
3.6 加入200μL的洗涤缓冲液，混匀。
3.7 用离心机离心5分钟，去除上清液。
3.8 加入50μL的去离子水，混匀。

4. DNA提取
4.1 将离心管放入PCR仪器中，按照PCR试剂盒说明书进行DNA提取。

5. PCR扩增
5.1 将提取的DNA加入PCR试剂盒中，按照PCR试剂盒说明书进行PCR扩增。
5.2 扩增条件为：95℃预变性5分钟，95℃变性30秒，58℃退火30秒，72℃延伸30秒，共35个循环。
5.3 扩增结束后，将PCR产物进行凝胶电泳，观察扩增产物。

6. 结果判定
6.1 如果扩增产物为阳性，说明该白蛉携带利什曼原虫。
6.2 如果扩增产物为阴性，说明该白蛉不携带利什曼原虫。

相关标准
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