一、范围
本标准适用于进出口动物源食品中氯霉素残留量的检测。

二、检测原理
样品经提取、净化后，采用液相色谱串联质谱法进行检测。

三、仪器设备和试剂
1. 液相色谱串联质谱仪
2. 气相色谱仪
3. 恒温振荡器
4. 离心机
5. 电子天平
6. 紫外可见分光光度计
7. 氯霉素标准品
8. 甲醇
9. 乙腈
10. 硫酸
11. 氢氧化钠
12. 氯仿
13. 乙酸乙酯
14. 硅胶管
15. 活性炭
16. 氨水
17. 磷酸二氢钾
18. 磷酸氢二钠
19. 磷酸三钠
20. 乙酸钠
21. 乙酸
22. 乙酸乙酯
23. 乙酸乙酯-甲醇（95:5，体积比）
24. 乙酸乙酯-甲醇（90:10，体积比）
25. 乙酸乙酯-甲醇（80:20，体积比）
26. 乙酸乙酯-甲醇（70:30，体积比）
27. 乙酸乙酯-甲醇（60:40，体积比）
28. 乙酸乙酯-甲醇（50:50，体积比）

四、样品的处理
1. 取样品5g，加入50mL甲醇，振荡提取30min；
2. 离心10min，取上清液；
3. 上清液加入10mL乙腈，振荡提取30min；
4. 离心10min，取上清液；
5. 上清液加入1mL硫酸，振荡提取30min；
6. 离心10min，取上清液；
7. 上清液加入1mL氢氧化钠，振荡提取30min；
8. 离心10min，取上清液；
9. 上清液加入10mL氯仿，振荡提取30min；
10. 离心10min，取上清液；
11. 上清液加入10mL乙酸乙酯，振荡提取30min；
12. 离心10min，取上清液；
13. 上清液加入10g硅胶管和1g活性炭，混合均匀；
14. 将混合物装入玻璃柱中，用乙酸乙酯-甲醇（95:5，体积比）洗涤；
15. 用乙酸乙酯-甲醇（90:10，体积比）洗涤；
16. 用乙酸乙酯-甲醇（80:20，体积比）洗涤；
17. 用乙酸乙酯-甲醇（70:30，体积比）洗涤；
18. 用乙酸乙酯-甲醇（60:40，体积比）洗涤；
19. 用乙酸乙酯-甲醇（50:50，体积比）洗涤；
20. 用氯仿洗涤；
21. 用乙酸乙酯洗涤；
22. 用乙酸洗涤；
23. 用乙酸乙酯-甲醇（95:5，体积比）洗涤；
24. 用乙酸乙酯-甲醇（90:10，体积比）洗涤；
25. 用乙酸乙酯-甲醇（80:20，体积比）洗涤；
26. 用乙酸乙酯-甲醇（70:30，体积比）洗涤；
27. 用乙酸乙酯-甲醇（60:40，体积比）洗涤；
28. 用乙酸乙酯-甲醇（50:50，体积比）洗涤；
29. 用氯仿洗涤；
30. 用乙酸乙酯洗涤；
31. 用乙酸洗涤；
32. 将洗涤液收集，浓缩至1mL，用氮气吹干，加入1mL乙酸乙酯，混合均匀。

五、检测方法
1. 液相色谱串联质谱条件
柱：Agilent ZORBAX SB-C18（2.1mm×50mm，1.8μm）
流动相：A相为0.1%甲酸水溶液，B相为乙腈
梯度程序：0-0.5min，5% B；0.5-2.5min，5%-95% B；2.5-3.5min，95% B；3.5-3.6min，95%-5% B；3.6-4.5min，5% B
流速：0.3mL/min
柱温：40℃
进样量：10μL
离子源：电喷雾离子源（ESI）
离子极性：正离子模式
离子化电压：4000V
碰撞能量：20eV
离子源温度：350℃
气体流量：10L/min
扫描方式：多反应监测（MRM）
2. 标准曲线的制备
取氯霉素标准品，加入乙酸乙酯，制备浓度为0.1、0.2、0.5、1、2、5、10μg/L的标准溶液，用液相色谱串联质谱法检测，绘制标准曲线。
3. 样品的检测
将样品处理后的溶液用液相色谱串联质谱法检测，根据标准曲线计算氯霉素残留量。

六、结果的计算与报告
1. 计算样品中氯霉素残留量的质量浓度。
2. 报告样品中氯霉素残留量的质量浓度。

相关标准
GB/T 5009.199-2017 食品中氯霉素的测定 液相色谱法
GB/T 22388-2008 食品中氯霉素的测定 液相色谱-串联质谱法
GB/T 22387-2008 食品中氯霉素的测定 气相色谱法
GB/T 22386-2008 食品中氯霉素的测定 高效液相色谱法
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