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国境口岸是我国对外开放的重要窗口，也是疫情传播的重要渠道。蚊类是东部马脑炎病毒的主要传播媒介之一，因此对国境口岸蚊类携带东部马脑炎病毒的检测方法的研究具有重要意义。

本标准采用RT-PCR法进行检测，该方法具有灵敏度高、特异性强、快速、准确等优点。具体操作步骤如下：

1.样品采集：在国境口岸采集蚊类样品，将其放入离心管中，加入1ml的PBS缓冲液，离心10min，将上清液转移到新的离心管中，即为样品。

2.核酸提取：将样品加入离心管中，加入200μl的核酸提取液，混匀后离心5min，将上清液转移到新的离心管中，加入200μl的乙醇，混匀后离心5min，将上清液转移到新的离心管中，加入500μl的洗涤缓冲液，混匀后离心5min，将上清液转移到新的离心管中，加入200μl的洗涤缓冲液，混匀后离心5min，将上清液转移到新的离心管中，加入50μl的去离子水，混匀后离心5min，将上清液转移到新的离心管中，即为核酸提取物。

3.RT-PCR反应：将核酸提取物加入PCR管中，加入适量的RT-PCR试剂，进行PCR反应，反应条件为：50℃反应10min，95℃反应5min，40个循环，每个循环包括95℃反应30s，55℃反应30s，72℃反应30s，最后72℃反应10min。

4.结果判定：根据PCR反应结果，判断样品是否携带东部马脑炎病毒。

本标准的实施可以有效地提高国境口岸蚊类携带东部马脑炎病毒的检测效率和准确性，对于保障国境口岸的疫情防控具有重要意义。

相关标准：
1. GB/T 4789.33-2016 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
2. GB/T 5009.33-2016 食品中亚硝酸盐的测定
3. GB/T 6682-2008 分析化学实验室通用规定
4. GB/T 191-2008 包装通用术语
5. GB/T 5009.3-2016 食品中蛋白质的测定