猴D型逆转录病毒是一种病毒，可以引起猴的免疫缺陷病毒感染。该病毒与人类免疫缺陷病毒（HIV）有很高的相似性，因此对于研究HIV的病理生理学、流行病学和疫苗研究等方面具有重要意义。本标准规定了猴D型逆转录病毒抗体检测方法，包括ELISA法和补体结合试验法。

1. ELISA法
1.1 试剂和设备
1.1.1 酶标板：96孔酶标板。
1.1.2 抗原：猴D型逆转录病毒抗原。
1.1.3 阻断剂：5%的非脂肪奶粉。
1.1.4 洗涤缓冲液：0.05%Tween-20的PBS缓冲液。
1.1.5 标准品：已知浓度的猴D型逆转录病毒抗体。
1.1.6 检测抗体：待检血清。
1.1.7 酶标仪：450nm波长的酶标仪。
1.2 操作步骤
1.2.1 酶标板预处理：将酶标板加入阻断剂，室温下孵育1小时，然后倒掉阻断剂。
1.2.2 加入抗原：将猴D型逆转录病毒抗原加入酶标板，室温下孵育2小时，然后倒掉抗原。
1.2.3 加入标准品和待检血清：将已知浓度的猴D型逆转录病毒抗体和待检血清加入酶标板，室温下孵育1小时。
1.2.4 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤酶标板3次。
1.2.5 加入检测抗体：将抗猴IgG-HRP加入酶标板，室温下孵育1小时。
1.2.6 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤酶标板3次。
1.2.7 加入底物：将TMB底物加入酶标板，室温下孵育30分钟。
1.2.8 停止反应：加入硫酸停止反应。
1.2.9 测定吸光度：用酶标仪测定吸光度值。
1.3 结果判定
1.3.1 标准曲线：用已知浓度的猴D型逆转录病毒抗体制作标准曲线。
1.3.2 结果计算：根据标准曲线计算待检血清中猴D型逆转录病毒抗体的浓度。

2. 补体结合试验法
2.1 试剂和设备
2.1.1 补体：兔抗猴补体。
2.1.2 抗原：猴D型逆转录病毒抗原。
2.1.3 标准品：已知浓度的猴D型逆转录病毒抗体。
2.1.4 检测抗体：待检血清。
2.1.5 96孔微孔板。
2.1.6 37℃恒温箱。
2.2 操作步骤
2.2.1 加入抗原：将猴D型逆转录病毒抗原加入96孔微孔板，室温下孵育2小时，然后倒掉抗原。
2.2.2 加入标准品和待检血清：将已知浓度的猴D型逆转录病毒抗体和待检血清加入96孔微孔板，室温下孵育1小时。
2.2.3 加入补体：将兔抗猴补体加入96孔微孔板，37℃恒温箱中孵育30分钟。
2.2.4 观察结果：观察96孔微孔板中是否有补体结合反应。
2.3 结果判定
2.3.1 补体结合反应：如果待检血清中存在猴D型逆转录病毒抗体，则会与抗原结合，形成免疫复合物，补体结合反应呈阳性。
2.3.2 结果计算：根据补体结合反应的阳性率计算待检血清中猴D型逆转录病毒抗体的浓度。

相关标准
GB/T 22470-2008 动物实验室生物安全规范
GB/T 22471-2008 动物实验室生物安全管理规范
GB/T 22472-2008 动物实验室生物安全检测规范
GB/T 22473-2008 动物实验室生物安全评价规范
GB/T 22474-2008 动物实验室生物安全应急预案规范