食源性病原体是指通过食品途径传播的病原体,包括细菌、病毒、真菌和寄生虫等。食源性病原体的检测对于保障食品安全和公共卫生至关重要。PCR技术是一种高灵敏度、高特异性的检测方法,已经成为食源性病原体检测的主要手段之一。
本标准主要针对PCR技术中的定性检测方法,即判断样品中是否存在目标病原体。样品制备是PCR检测的关键步骤之一,直接影响检测结果的准确性和可靠性。因此,本标准对样品制备的要求进行了详细规定。
1.样品采集
样品采集应当遵循卫生部门的相关规定,采集时应当注意避免污染和交叉感染。不同样品的采集方法有所不同,应当根据具体情况进行选择。采集后应当尽快送至实验室进行处理。
2.样品处理
样品处理包括样品的预处理和裂解。预处理的目的是去除样品中的干扰物质,如油脂、蛋白质等。裂解的目的是破坏细胞壁,释放目标病原体的核酸。不同样品的预处理和裂解方法有所不同,应当根据具体情况进行选择。同时,应当注意避免样品的过度处理,以免影响核酸的提取和PCR反应的进行。
3.核酸提取
核酸提取是样品制备的最后一步,也是最关键的一步。核酸提取的质量直接影响PCR反应的结果。核酸提取方法应当选择适合样品类型和目标病原体的方法,并严格按照操作规程进行。同时,应当注意避免核酸的污染和降解,以免影响PCR反应的进行。
4.质量控制
样品制备过程中应当进行质量控制,包括负对照、阳性对照和内对照等。负对照是指不含目标病原体的样品,用于检测样品制备过程中的污染情况;阳性对照是指含有目标病原体的样品,用于检测PCR反应的灵敏度和特异性;内对照是指添加到样品中的一种外源性核酸,用于检测核酸提取和PCR反应的效率。
相关标准
GB/T 4789.30-2016 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
GB/T 4789.4-2016 食品微生物学检验 肠道致病菌检验
GB/T 4789.5-2016 食品微生物学检验 耐热性大肠杆菌检验
GB/T 4789.7-2016 食品微生物学检验 菌落总数和酵母菌、霉菌总数的测定
GB/T 22388-2008 食品中基因改造成分定量检测方法