棉花皱叶病毒是一种重要的棉花病毒病害，能够引起棉花叶片皱缩、变黄、变褐、变干等症状，严重影响棉花的产量和质量。为了防止棉花皱叶病毒的传播和扩散，需要对棉花进行检疫鉴定。本标准规定了棉花皱叶病毒分子检疫鉴定方法，包括PCR和ELISA两种方法。

1. PCR检测方法
1.1 试剂和仪器
PCR试剂盒、PCR仪、电泳仪、紫外线照射器等。
1.2 样品处理
将棉花叶片样品切成小块，加入液氮中研磨成粉末，取1g样品加入2ml提取液中，振荡混合，离心沉淀，取上清液作为PCR反应模板。
1.3 PCR反应体系
PCR反应体系总体积为25μl，包括PCR反应缓冲液、MgCl2、dNTPs、引物、Taq酶和模板DNA。PCR反应条件为：95℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，共35个循环。PCR反应结束后，将反应产物进行电泳分析。
1.4 结果判定
PCR反应产物经电泳分析，出现目标条带，且大小与预期一致，即为阳性结果；未出现目标条带，或大小与预期不一致，即为阴性结果。

2. ELISA检测方法
2.1 试剂和仪器
ELISA试剂盒、微孔板、洗板液、显色液、酶标仪等。
2.2 样品处理
将棉花叶片样品切成小块，加入液氮中研磨成粉末，取0.1g样品加入1ml提取液中，振荡混合，离心沉淀，取上清液作为ELISA反应模板。
2.3 ELISA反应体系
将样品加入微孔板中，加入特异性抗体，孵育后加入酶标记的二抗，再次孵育后加入显色液，最后加入停止液。ELISA反应结束后，用酶标仪测定吸光度值。
2.4 结果判定
ELISA反应吸光度值大于阈值，即为阳性结果；吸光度值小于阈值，即为阴性结果。

相关标准
GB/T 191-2008 化学分析方法通用规定
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范
GB/T 13025-2003 棉花种子品质检验方法
GB/T 23261-2009 棉花纤维质量检验方法
GB/T 24247-2009 棉花籽棉质量检验方法