草莓簇生植原体是草莓病害中的一种重要病原体,能够引起草莓的黄化、萎缩、死亡等症状,对草莓产业造成了严重的危害。为了保障草莓产业的健康发展,需要对草莓簇生植原体进行检疫鉴定。
本标准主要包括PCR和ELISA两种方法,其中PCR方法适用于草莓簇生植原体的检测和鉴定,ELISA方法适用于草莓簇生植原体的快速筛查。
1. PCR方法
1.1 样品处理
将草莓簇生植原体样品(如草莓叶片、根系、茎等)取出,用无菌水或PBS缓冲液清洗干净,然后将样品切碎,加入适量的提取液中,进行DNA提取。
1.2 PCR反应
将提取的DNA样品加入PCR反应管中,加入PCR反应液,进行PCR扩增。PCR反应条件如下:95℃预变性5min,95℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸1min,共35个循环,最后72℃延伸10min。
1.3 PCR产物检测
将PCR产物进行凝胶电泳,观察PCR产物的大小和数量,判断是否存在草莓簇生植原体。
2. ELISA方法
2.1 样品处理
将草莓簇生植原体样品(如草莓叶片、根系、茎等)取出,用无菌水或PBS缓冲液清洗干净,然后将样品切碎,加入适量的提取液中,进行蛋白质提取。
2.2 ELISA反应
将提取的蛋白质样品加入ELISA板中,加入特异性抗体,进行ELISA反应。ELISA反应条件如下:37℃孵育1h,洗涤3次,加入辣根过氧化物酶标记的二抗,37℃孵育1h,洗涤3次,加入底物,37℃孵育30min,加入停止液,测定OD值。
2.3 ELISA结果判断
根据OD值判断样品中是否存在草莓簇生植原体。
3. 生物学特性
草莓簇生植原体为革兰氏阴性菌,菌体呈细长的螺旋形,大小约为0.3-0.5μm×1.5-3.0μm,具有一根或多根鞭毛,能够自由游动。草莓簇生植原体能够在寄主植物内长期存活,通过种子、嫁接、昆虫传播等方式进行传播。
相关标准
GB/T 18411-2015 植物检疫技术术语
GB/T 18412-2015 植物检疫规程
GB/T 18413-2015 植物检疫申报
GB/T 18414-2015 植物检疫处理
GB/T 18415-2015 植物检疫证书