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猪劳森氏胞内菌是一种常见的猪源性细菌，能引起猪的呼吸道、消化道、泌尿生殖道等多种疾病，对猪养殖业造成了严重的经济损失。为了保障猪肉产品的质量安全，需要对猪劳森氏胞内菌进行检测。荧光PCR技术是一种快速、准确、灵敏的检测方法，已经广泛应用于猪劳森氏胞内菌的检测。为了规范猪劳森氏胞内菌荧光PCR检疫技术，保证检测结果的准确性和可靠性，制定了本标准。

1.范围
本标准适用于猪劳森氏胞内菌荧光PCR检疫技术的要求、方法、步骤、结果判定及质量控制等内容。

2.引用标准
GB/T 6682-2008 分析化学实验室用水质量规格和评价方法
GB/T 191-2008 包装、装运、储存标志和说明文件的编制
GB/T 2828.1-2012 采样检验程序 第1部分：按计划采样程序
GB/T 2829-2002 采样检验程序与表观检验程序的抽样方法
GB/T 17626.2-2006 电磁兼容性（EMC） 第2部分：环境试验 第2-5节：阻尼振动试验

3.术语和定义
3.1 猪劳森氏胞内菌
指属于劳森氏菌属的猪源性细菌，包括劳森氏菌、副劳森氏菌等。

3.2 荧光PCR
指在PCR反应中加入荧光探针，通过检测荧光信号来判断PCR反应的结果。

3.3 检测限
指在特定条件下，检测方法能够检测到的最低浓度的目标物。

3.4 检测灵敏度
指检测方法能够检测到的最低浓度的目标物。

3.5 检测特异性
指检测方法能够区分目标物和其他非目标物的能力。

4.要求
4.1 仪器设备
4.1.1 PCR仪：应具有精确的温度控制和均匀的温度分布，能够进行荧光检测。
4.1.2 荧光定量PCR仪：应具有精确的荧光检测和定量功能。
4.1.3 电泳仪：应具有高分辨率和高灵敏度的检测能力。
4.1.4 荧光显微镜：应具有高分辨率和高灵敏度的检测能力。

4.2 试剂和材料
4.2.1 PCR试剂盒：应具有高灵敏度和高特异性，能够进行荧光PCR反应。
4.2.2 荧光探针：应具有高荧光强度和高特异性。
4.2.3 DNA提取试剂盒：应具有高纯度和高回收率。
4.2.4 纯化水：应符合GB/T 6682-2008的要求。
4.2.5 PCR扩增板、PCR扩增管、PCR扩增膜、PCR扩增架等：应符合GB/T 191-2008的要求。

4.3 检测方法
4.3.1 样品采集：应按照GB/T 2828.1-2012和GB/T 2829-2002的要求进行采样。
4.3.2 DNA提取：应按照试剂盒说明书的要求进行DNA提取。
4.3.3 PCR反应：应按照试剂盒说明书的要求进行PCR反应。
4.3.4 荧光检测：应使用荧光定量PCR仪进行荧光检测。
4.3.5 结果判定：应按照试剂盒说明书的要求进行结果判定。

4.4 质量控制
4.4.1 试剂盒质量控制：应按照试剂盒说明书的要求进行质量控制。
4.4.2 PCR反应质量控制：应按照试剂盒说明书的要求进行质量控制。
4.4.3 DNA提取质量控制：应按照试剂盒说明书的要求进行质量控制。
4.4.4 阴性对照：应使用纯化水作为阴性对照。
4.4.5 阳性对照：应使用已知含有猪劳森氏胞内菌的样品作为阳性对照。

5.结果判定
5.1 阳性判定：荧光定量PCR仪显示的荧光信号强度大于阈值。
5.2 阴性判定：荧光定量PCR仪显示的荧光信号强度小于阈值。
5.3 不确定判定：荧光定量PCR仪显示的荧光信号强度在阈值附近，需要进行重复检测。

6.报告内容
6.1 样品信息：包括样品编号、采样日期、采样地点、采样人员等信息。
6.2 检测结果：包括阳性、阴性、不确定等结果。
6.3 检测限、检测灵敏度、检测特异性等指标。

相关标准：
GB/T 6682-2008 分析化学实验室用水质量规格和评价方法
GB/T 191-2008 包装、装运、储存标志和说明文件的编制
GB/T 2828.1-2012 采样检验程序 第1部分：按计划采样程序
GB/T 2829-2002 采样检验程序与表观检验程序的抽样方法
GB/T 17626.2-2006 电磁兼容性（EMC） 第2部分：环境试验 第2-5节：阻尼振动试验