凤仙花坏死斑病毒是一种常见的凤仙花病毒，能够引起凤仙花叶片上出现黄色或白色的坏死斑点，严重影响凤仙花的观赏价值。为了防止凤仙花坏死斑病毒的传播，需要对凤仙花进行检疫鉴定。本标准规定了凤仙花坏死斑病毒检疫鉴定方法，具体步骤如下：

1. 样品采集

从疑似感染凤仙花的叶片、茎、花等部位采集样品，避免受到其他病毒的污染。将样品放入离心管中，标注好样品编号和采集日期。

2. 样品提取

将样品取出，加入适量的提取液中，使用离心机进行离心，离心后将上清液转移到新的离心管中，即为提取液。提取液可以直接用于PCR扩增或ELISA检测。

3. PCR扩增

将提取液加入PCR反应管中，加入PCR试剂盒中的PCR反应液，进行PCR扩增。PCR扩增条件为：95℃预变性5min，95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，共35个循环。扩增后，将PCR产物进行凝胶电泳，观察PCR产物的大小和数量。

4. ELISA检测

将提取液加入ELISA板中，加入ELISA试剂盒中的检测液，进行ELISA检测。ELISA检测结果为光密度值，根据标准曲线计算样品中凤仙花坏死斑病毒的含量。

相关标准
GB/T 28469-2012 植物病毒检疫技术术语
GB/T 28470-2012 植物病毒检疫技术通则
GB/T 28471-2012 植物病毒检疫技术样品采集、处理和保存
GB/T 28472-2012 植物病毒检疫技术PCR检测方法
GB/T 28473-2012 植物病毒检疫技术ELISA检测方法