SN/T 3422-2012
北美松疱锈病菌检疫鉴定方法
发布时间:2012-12-12 实施时间:2013-07-01


北美松疱锈病是一种由真菌引起的病害,主要危害松树,对松木及其制品的贸易造成了很大的影响。为了保护我国的森林资源,防止病害的传播,需要对进口和出口的松木及其制品进行检疫鉴定。本标准就是为了规范北美松疱锈病菌的检疫鉴定方法。

1. 菌株的分离
从疑似感染的松木或其制品中取样,将样品切成小块,用无菌水浸泡后,将其接种到含有适当营养物质的培养基上,进行培养。待菌落生长到一定大小后,进行分离纯化,得到单一的菌株。

2. 菌株的培养
将分离纯化后的菌株接种到含有适当营养物质的培养基上,进行培养。培养条件为25℃,光照强度为2000lx,相对湿度为70%。培养时间为7-10天。

3. 菌株的鉴定
通过形态学、生理生化和分子生物学等方法对菌株进行鉴定。形态学鉴定包括菌落形态、孢子形态和菌丝形态等;生理生化鉴定包括生长速度、产孢量、色素产生和代谢产物等;分子生物学鉴定包括PCR扩增和序列分析等。

4. 检测方法
采用PCR技术对样品进行检测。PCR扩增条件为94℃预变性2min,94℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸1min,共35个循环。扩增产物经过电泳分析,检测结果为阳性时,表明样品中存在北美松疱锈病菌。

相关标准
GB/T 19277-2016 森林有害生物检疫技术术语
GB/T 19278-2016 森林有害生物检疫技术通则
GB/T 19279-2016 森林有害生物检疫技术检测方法
GB/T 19280-2016 森林有害生物检疫技术检疫处理
GB/T 19281-2016 森林有害生物检疫技术检疫证书