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松材线虫是一种危害极大的植物寄生线虫，能够引起松树的死亡。为了及时发现和控制松材线虫的传播，需要对其进行检测。本标准提供了一种可靠的松材线虫实时荧光PCR检测方法。

1.范围
本标准规定了松材线虫实时荧光PCR检测方法。

2.引用文件
GB/T 6682-2008 分析化学实验室用水质量规格和评价方法
GB/T 191-2008 包装通用术语
GB/T 8170-2008 数字表示法和圆整规则
GB/T 17215.301-2007 食品中农药最大残留限量的测定 气相色谱法
GB/T 17215.302-2007 食品中农药最大残留限量的测定 液相色谱法

3.术语和定义
3.1 实时荧光PCR
实时荧光PCR是一种基于PCR技术的分子生物学方法，能够在PCR反应过程中实时检测PCR产物的数量。

3.2 荧光探针
荧光探针是一种能够与PCR产物特异性结合并发出荧光信号的分子探针。

3.3 标准曲线
标准曲线是一种用于定量PCR产物的方法，通过制备一系列已知浓度的PCR产物，建立PCR产物浓度与荧光信号强度之间的关系曲线。

4.原理
本标准采用实时荧光PCR技术，利用荧光探针特异性结合PCR产物并发出荧光信号的原理，检测松材线虫的存在。

5.试剂和材料
5.1 试剂
PCR反应试剂盒、荧光探针、引物、DNA提取试剂盒等。

5.2 材料
PCR仪、离心管、PCR板、移液器、显微镜等。

6.样品处理
6.1 样品采集
采集松树根部土壤样品或松树干部样品。

6.2 样品处理
将样品加入DNA提取试剂盒中，按照说明书提取DNA。

7.实验步骤
7.1 PCR反应
按照PCR反应试剂盒说明书进行PCR反应。

7.2 荧光探针检测
在PCR反应过程中，加入荧光探针进行荧光探针检测。

7.3 建立标准曲线
制备一系列已知浓度的PCR产物，建立PCR产物浓度与荧光信号强度之间的关系曲线。

8.结果判定
根据荧光信号强度和标准曲线，判断样品中是否存在松材线虫。

9.质量控制
9.1 实验室环境应符合实验要求。
9.2 试剂和材料应符合质量要求。
9.3 操作人员应具备PCR技术和实时荧光PCR技术的基本知识和操作技能。

相关标准：
GB/T 6682-2008 分析化学实验室用水质量规格和评价方法
GB/T 191-2008 包装通用术语
GB/T 8170-2008 数字表示法和圆整规则
GB/T 17215.301-2007 食品中农药最大残留限量的测定 气相色谱法
GB/T 17215.302-2007 食品中农药最大残留限量的测定 液相色谱法