菜豆疫霉是一种常见的植物病原真菌,能够引起豆科植物的疫病。为了保护我国的农业生产,需要对进出口的种子、植物及其制品进行检疫。本标准旨在规定菜豆疫霉检疫鉴定方法,以确保检疫工作的准确性和可靠性。
1 范围
本标准适用于菜豆疫霉的检疫鉴定。
2 原理
采用显微镜观察法,根据菜豆疫霉的形态特征进行鉴定。
3 试验材料和设备
3.1 试验材料
(1)菜豆疫霉菌株
(2)玻片、盖玻片、载玻片
(3)甲醇、苯酚、甲苯、酒精、碘酒、甲醛、石蜡、苏木精、乙醇、甲酸、硝酸、氢氧化钠、氯化钠、磷酸盐缓冲液等试剂。
3.2 试验设备
(1)显微镜
(2)恒温培养箱
(3)电子天平
(4)移液管、吸管、滴管等实验用具。
4 操作步骤
4.1 菜豆疫霉菌株的培养
将菜豆疫霉菌株接种于含有3%麦芽糖的琼脂培养基上,培养温度为25℃,培养时间为7天。
4.2 制备菜豆疫霉菌株的悬浮液
将菜豆疫霉菌株培养7天后,用0.85%氯化钠溶液洗涤3次,然后用0.85%氯化钠溶液调节菌液浓度至10^6个/ml。
4.3 制备玻片
将玻片用甲醇、苯酚、甲苯、酒精、碘酒、甲醛等试剂进行清洗和消毒,然后用石蜡将菜豆疫霉菌株的悬浮液滴于玻片上,晾干后用苏木精染色。
4.4 显微镜观察
将制备好的玻片放在显微镜下观察,根据菜豆疫霉的形态特征进行鉴定。
5 结果判定
5.1 菜豆疫霉的形态特征
菜豆疫霉的菌丝呈灰色,直径为2-3微米,有分枝,分枝角度为45度左右,有隔膜,隔膜间距为2-3微米。孢子呈椭圆形或卵圆形,大小为3-4微米×5-6微米,有一定的透明度,表面有细小的颗粒状突起。
5.2 结果判定
若在制备的玻片上观察到符合菜豆疫霉的形态特征,则判定为菜豆疫霉阳性。
6 报告内容
检疫报告应包括以下内容:
(1)检疫单位名称、地址、联系人、联系电话等基本信息;
(2)检疫对象的名称、数量、产地、运输方式等信息;
(3)检疫结果及检测方法;
(4)检疫人员签字和日期。
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