咖啡碱是茶叶中的一种重要成分，也是茶叶的主要药理成分之一。咖啡碱的含量不仅影响茶叶的品质，还与茶叶的保健功能密切相关。因此，准确测定茶叶中咖啡碱的含量对于茶叶的质量控制和保健价值的评估具有重要意义。

本标准适用于进出口茶叶中咖啡碱的测定。测定方法采用高效液相色谱法（HPLC）。

1. 原料和试剂
1.1 标准品：咖啡碱标准品。
1.2 乙醇：纯度为95%。
1.3 甲醇：纯度为HPLC级。
1.4 水：纯度为HPLC级。
1.5 磷酸二氢钾：纯度为AR级。
1.6 磷酸氢二钠：纯度为AR级。
1.7 乙酸钠：纯度为AR级。
1.8 乙酸：纯度为AR级。
1.9 乙腈：纯度为HPLC级。

2. 仪器设备
2.1 高效液相色谱仪。
2.2 色谱柱：C18色谱柱。
2.3 称量仪。
2.4 超声波清洗器。
2.5 滤膜：0.45μm。

3. 样品的制备
3.1 取适量的茶叶样品，粉碎成细粉末。
3.2 取0.5g茶叶粉末，加入50ml乙醇，超声波清洗10min，过滤，取滤液10ml，加入10ml甲醇，超声波清洗10min，过滤，取滤液5ml，即为样品溶液。

4. 操作步骤
4.1 色谱条件
色谱柱：C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）。
流动相：甲醇-水-磷酸二氢钾（10:90:0.1，pH=3.0）。
流速：1.0ml/min。
检测波长：275nm。
柱温：25℃。

4.2 样品测定
4.2.1 取适量的咖啡碱标准品，分别加入10ml甲醇中，制成浓度为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/ml的标准曲线溶液。
4.2.2 取5ml样品溶液，加入10ml甲醇，超声波清洗10min，过滤，取滤液1ml，注入色谱仪进行测定。
4.2.3 根据标准曲线计算样品中咖啡碱的含量。

相关标准
GB/T 8303-2018 茶叶
GB/T 14470-2018 茶叶中咖啡碱的测定
GB/T 8313-2018 咖啡
GB/T 8314-2018 咖啡中咖啡碱的测定
GB/T 8315-2018 咖啡因