番茄黑环病毒是一种常见的番茄病毒，能够引起番茄叶片上出现黑环状斑点，导致叶片变形、萎缩、凋谢等症状，严重影响番茄的产量和质量。为了防止番茄黑环病毒的传播和扩散，需要对番茄进行检疫鉴定。本标准规定了番茄黑环病毒检疫鉴定方法，以确保番茄的质量和安全。

1.范围
本标准适用于番茄黑环病毒的检测和鉴定。

2.样品采集
2.1 采样时间：在番茄生长期间，当番茄叶片上出现黑环状斑点时，采集叶片样品。
2.2 采样方法：采用无菌剪刀或无菌手套，将叶片样品剪下，放入无菌离心管中。

3.样品提取
3.1 样品处理：将采集的叶片样品在无菌条件下，用无菌剪刀剪成小块，加入无菌研钵中。
3.2 样品提取：加入适量的无菌磨砂液，用无菌研钵研磨均匀，离心沉淀，取上清液即可。

4.检测方法
4.1 PCR扩增：将提取的上清液加入PCR反应管中，加入PCR扩增试剂，进行PCR扩增。
4.2 凝胶电泳：将PCR扩增产物进行凝胶电泳，观察PCR产物带型，判断是否存在番茄黑环病毒。

5.结果判定
5.1 PCR结果：出现明显的PCR产物带型，且大小与预期相符，判定为阳性；未出现PCR产物带型，判定为阴性。
5.2 凝胶电泳结果：出现明显的PCR产物带型，且大小与预期相符，判定为阳性；未出现PCR产物带型，判定为阴性。

相关标准
GB/T 31665-2015 植物病毒检疫鉴定方法
GB/T 31666-2015 植物病毒检测方法
GB/T 31667-2015 植物病毒检测试剂盒
GB/T 31668-2015 植物病毒检测设备
GB/T 31669-2015 植物病毒检测质量控制