出口乳、蛋、豆类食品是我国重要的出口食品，其中蛋白质含量是重要的指标之一。本标准采用考马斯亮蓝法测定出口乳、蛋、豆类食品中蛋白质含量。

1.范围
本标准适用于出口乳、蛋、豆类食品中蛋白质含量的测定。

2.方法概述
将样品中的蛋白质与考马斯亮蓝反应生成蓝色复合物，根据复合物的吸光度测定蛋白质含量。

3.仪器和设备
3.1 分光光度计：可测量340nm波长的分光光度计。
3.2 恒温水浴器：可控制温度在37℃±1℃的恒温水浴器。
3.3 离心机：转速为3000r/min的离心机。

4.试剂和材料
4.1 考马斯亮蓝：纯度为98%以上。
4.2 氯化钠：分析纯。
4.3 磷酸二氢钠：分析纯。
4.4 磷酸氢二钾：分析纯。
4.5 氢氧化钠：分析纯。
4.6 蛋白质标准品：纯度为98%以上。

5.样品的制备
5.1 乳类食品：取适量样品，加入等量的氯化钠溶液，搅拌均匀后离心，取上清液作为样品。
5.2 蛋类食品：取适量样品，加入等量的氯化钠溶液，搅拌均匀后离心，取上清液作为样品。
5.3 豆类食品：取适量样品，加入等量的氯化钠溶液，搅拌均匀后离心，取上清液作为样品。

6.操作步骤
6.1 标准曲线的制备
6.1.1 取蛋白质标准品0.1g，加入10ml磷酸二氢钠溶液，搅拌均匀后加入90ml考马斯亮蓝溶液，搅拌均匀后放置30min。
6.1.2 用分光光度计测定吸光度，制备标准曲线。
6.2 样品的测定
6.2.1 取适量样品，加入等量的氯化钠溶液，搅拌均匀后离心，取上清液。
6.2.2 取1ml上清液，加入9ml考马斯亮蓝溶液，搅拌均匀后放置30min。
6.2.3 用分光光度计测定吸光度，根据标准曲线计算蛋白质含量。

7.结果的计算
样品中蛋白质含量的计算公式为：
样品中蛋白质含量（g/L）=（样品吸光度-空白吸光度）×标准曲线斜率×稀释倍数

8.质量控制
8.1 标准曲线的制备应每次测定前制备。
8.2 样品的测定应重复3次，取平均值作为结果。
8.3 样品的测定结果应在标准曲线范围内。

相关标准
GB/T 5009.5-2016 食品中蛋白质的测定
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