一、范围
本标准适用于国境口岸沙门氏菌、志贺氏菌、大肠杆菌O157:H7的三重荧光PCR检测方法。

二、引用文件
GB/T 6682 分析化学实验室用水质量规格和评价方法
GB/T 191-2008 包装、储存和运输标志和标记通用规则
GB/T 2828.1-2012 采样检验程序 第1部分：按计划采样程序
GB/T 2829-2002 采样检验程序与抽样表的制定
GB/T 17626.2-2006 电磁兼容性（EMC） 第2部分：环境试验 第2-5节：阻尼振动试验（Sinusoidal）

三、术语和定义
3.1 沙门氏菌
指肠道沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌等沙门氏菌属菌株。

3.2 志贺氏菌
指致病性大肠杆菌中的O157:H7菌株。

3.3 大肠杆菌O157:H7
指大肠杆菌中的O157:H7菌株。

3.4 三重荧光PCR
指同时检测三种细菌的PCR方法，其中沙门氏菌、志贺氏菌、大肠杆菌O157:H7分别使用不同的荧光探针。

四、原理
本方法采用三重荧光PCR技术，同时检测沙门氏菌、志贺氏菌、大肠杆菌O157:H7。PCR反应体系中含有三种不同的荧光探针，分别用于检测三种不同的细菌。PCR反应结束后，通过荧光定量PCR仪检测荧光信号，判断样品中是否存在沙门氏菌、志贺氏菌、大肠杆菌O157:H7。

五、试剂和材料
5.1 三重荧光PCR试剂盒
5.2 DNA提取试剂盒
5.3 离心管、PCR管、PCR板
5.4 超纯水
5.5 标准菌株

六、仪器设备
6.1 PCR仪
6.2 荧光定量PCR仪
6.3 离心机
6.4 电子天平
6.5 恒温水浴器

七、样品处理
7.1 样品采集
按照GB/T 2828.1-2012和GB/T 2829-2002的要求采集样品。

7.2 样品处理
将样品进行DNA提取，按照试剂盒说明书进行操作。

八、操作步骤
8.1 PCR反应
按照试剂盒说明书进行PCR反应。

8.2 荧光检测
将PCR反应产物进行荧光检测，按照荧光定量PCR仪说明书进行操作。

九、结果判定
9.1 阳性判定
当荧光定量PCR仪检测到样品中存在沙门氏菌、志贺氏菌、大肠杆菌O157:H7时，判定为阳性。

9.2 阴性判定
当荧光定量PCR仪未检测到样品中存在沙门氏菌、志贺氏菌、大肠杆菌O157:H7时，判定为阴性。

十、质量控制
10.1 试剂质量控制
使用符合要求的试剂盒。

10.2 样品质量控制
使用符合要求的标准菌株进行质量控制。

十一、报告格式
报告应包括样品信息、检测结果、检测方法、检测日期等内容。

相关标准
GB/T 6682 分析化学实验室用水质量规格和评价方法
GB/T 191-2008 包装、储存和运输标志和标记通用规则
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GB/T 17626.2-2006 电磁兼容性（EMC） 第2部分：环境试验 第2-5节：阻尼振动试验（Sinusoidal）