SN/T 4280.1-2015
国境口岸红头丽蝇DNA条形码鉴定方法
发布时间:2015-05-26 实施时间:2016-01-01
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红头丽蝇是一种重要的农业害虫,对果树、蔬菜等农作物造成严重危害。为了防止红头丽蝇的传播和扩散,需要对其进行准确鉴定。传统的鉴定方法需要对显微镜下的形态特征进行观察,操作繁琐、耗时长、准确率低。而DNA条形码技术则可以通过对红头丽蝇的DNA序列进行分析,快速、准确地鉴定其种属和亚种。
本标准适用于国境口岸对进出口货物中的红头丽蝇进行鉴定。具体步骤如下:
1. 样品采集:从进出口货物中采集红头丽蝇样品,将其放入离心管中,加入细胞裂解液,振荡混合,离心沉淀,取上清液备用。
2. DNA提取:使用DNA提取试剂盒对上清液中的DNA进行提取,按照试剂盒说明书进行操作。
3. PCR扩增:使用红头丽蝇特异性引物对DNA进行PCR扩增,扩增条件为:95℃预变性5min,95℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸45s,共35个循环,72℃延伸10min。
4. PCR产物纯化:使用PCR产物纯化试剂盒对PCR产物进行纯化,按照试剂盒说明书进行操作。
5. 测序:将PCR产物送至测序公司进行测序,测序结果以FASTA格式输出。
6. 数据分析:使用BLAST软件将测序结果与GenBank数据库中的红头丽蝇DNA条形码序列进行比对,确定样品的种属和亚种。
相关标准:
GB/T 19423-2004 生物技术术语
GB/T 19424-2004 生物技术实验室安全规范
GB/T 19425-2004 生物技术实验室设计规范
GB/T 19426-2004 生物技术实验室操作规范
GB/T 19427-2004 生物技术实验室质量管理规范